Tesis Doctorado
Caracterización molecular, bilogía e inmunológica de fosfolipasas d del venero de loxosceles laeta
Autor
Catalán-Rodríguez, Alejandro
Institución
Resumen
La familia de proteínas fosfolipasas D (PLD), presentes en el veneno de arañas del
género Loxosceles, ha sido descrita como el principal responsable de los efectos tóxicos
observados en el Ioxoscelismo. En Chile, Loxosceles !aeta es la única especie descrita, y es
considerada como una de las especies más toxicas del género. A la fecha, en nuestro país no
existen estudios moleculares destinados a caracterizar el veneno de esta araña. Con el objetivo
de caracterizar a nivel molecular, funcional e inmunológico isoformas de fosfolipasas D
presentes en el veneno de glándulas de L. !aeta, se utilizaron varias secuencias de PLD de L.
!aeta como guía para la amplificación por PCR y posterior clonaje a partir de una biblioteca de
cDNA, de dos nuevas isoformas de fosfolipasa D, denominadas LIPLD 1 y LIPLD2. Expresión
heteróloga en E. coli de ambas proteínas recombinantes y posterior evaluación en ensayos de
hemolisis de glóbulos rojos humanos y actividad de esfingomielinasa, demostró que la
isoforma rLIPLD2 fue inactiva en comparación con rLIPLD 1. Análisis bioinformáticos,
indicaron una clara relación entre las nuevas isoformas con las PLD descritas previamente en
la literatura, además se identificaron potenciales residuos de aminoácidos presentes en el
dominio conservado glicerofosforil diester-fosfodiesterasa (GDPD) capaces de interactuar con
el sustrato esfingomielina, de los cuales sustituciones de S262, W256 y D259 del dominio
GDPD de LIPLDI fueron capaces de inactivar a la enzima. Anticuerpos policlonales contra
rLIPLD 1 y rLIPLD2 presentaron reactividad cruzada entre ellas y con el veneno de L. !aeta.
Además fueron capaces de neutralizar la actividad tóxica del mismo, en ensayos in vitro y en
inmunización in vivo en conejos. Isoformas inactivas, como rLIPLD2 y variantes mutantes de
isoformas activas de LIPLDs, poseen un potencial biotecnológico como posibles inmunógenos
en el diagnóstico y tratamiento del Ioxoscelismo. PFCHA-Becas Doctorado en Ciencias Biológicas Mención Biología Celular y Molecular 210p. PFCHA-Becas TERMINADA