This study aimed to demonstrate for the first time the presence of Nosema ceranae in the Valparaíso District. The analised bee samples were obtained in the Valparaíso Region, between 2011 and 2012, from beehives located in San Antonio, Limache and La Ligua. Samples obtained from groups of 60 bees were macerated and analysed by phase contrast microscopy at 40x. Then, DNA was extracted and the gene that encodes for 16SrRNA of Nosema apis and N. ceranae was amplified by multiplex PCR. 100% of the samples were infected by N. ceranae, while N. apis was not detected. During the period of study 2,915 colonies died in the Valparaíso Region which is 47.3% of the total hives of the Region. The loss of beehives during this period in the V Region of Chile could be related to either the lack of training in management and health monitoring of the colonies or the presence of N. ceranae.  El presente estudio demostró por primera vez la presencia de Nosema ceranae en la V Región de Valparaíso. Las muestras analizadas fueron obtenidas en la Región de Valparaíso, pertenecientes a colmenas ubicadas en las localidades de San Antonio, Limache y La Ligua. Las muestras obtenidas de grupos de 60 abejas fueron maceradas y analizadas por microscopia de contraste de fases amplificada a 40x y posteriormente confirmadas por la técnica molecular PCR múltiple. Los resultados obtenidos indicaron que las muestras provenientes de apiarios chilenos fueron positivas a N. ceranae, mostrando ausencia de Nosema apis. En el período de estudio (2011-2012) se produjo la muerte de 2.915 colmenas en la Región de Valparaíso que cuenta con 6.167 colmenas, cifra que corresponde al 47,3% del total. La muerte de colmenas observada en este periodo en la V Región de Chile podría deberse a la presencia de N. ceranae, pudiendo estar asociada a la falta de capacitación en el manejo y control sanitario de las colmenas.