Diversidad clonal de Enterococcus faecalis, Pseudomonas putida, Propionibacterium acnes aislados desde infecciones endodónticas persistentes.

Abstract

El fracaso de la terapia endodóntica está asociado en un gran porcentaje a la persistencia bacteriana. Los microorganismos asociados a las infecciones endodónticas persistentes representan aún un mundo no explorado en su totalidad ya que solo el nivel de evidencia disponible ha permitido identificar su composición, pero aún queda por dilucidar entre otras cosas, cual es la posible diversidad clonal, lo que nos permitiría caracterizarlas, ayudándonos a comprender de mejor manera su patogenicidad y la capacidad de ciertas especies o de cepas de una misma especie para sobrevivir al tratamiento. Por lo mencionado, el propósito de este estudio fue conocer la diversidad clonal de aislados de Enterococcus faecalis, Pseudomonas putida, Propionibacterium acnes obtenidos desde dientes con infecciones endodónticas persistentes, empleando técnicas moleculares como macrorestricción del genoma por electroforesis en gel de campo pulsado (Pulsed field gel electrophoresis, PFGE), amplificación aleatoria del ADN polimórfico (Random Amplified Polimorphic DNA, RAPD) y reacción en cadena de la Polimerasa de elementos Palindrómicos Extragénicos Repetitivos (Repetitive element sequence based-Polimerase Chain Reaction REP-PCR) respectivamente. El análisis de PFGE se realizó con el software BioNumerics, versión 6.3 (Applied Maths, Inc., Austin, TX, USA) para E. faecalis y GelJ 2.0 para Pseudomonas spp. y el criterio utilizado para la construcción de las agrupaciones o cluster fue el coeficiente Dice con nivel de tolerancia 1.5-2%. Finalmente se construyó un dendrograma de los cluster, estableciendo el 85% como corte para clasificar un grupo estrechamente relacionado. Las secuencias recA se analizaron, utilizando el software Geneious® 9.1.8, empleando el método neighbor-joining y el modelo de distancia genética de Jukes-Cantos, con 9999 réplicas de remuestreo de arranque. Los aislados de E. faecalis presentaron dos grupos clonales con un 72.3% índice de similitud, en tanto que P. putida mostró dos grupos clonales y policlonalidad en dos aislados de un mismo paciente. Por su parte, C. acnes no se logró amplificar mediante REP-PCR, por lo que se utilizó la filotipificación que permitió la amplificación de las secuencias de nucleótidos recA mostrando 2 grupos clonales. Se observó homogeneidad y heterogeneidad entre cepas de diferentes pacientes y un alto grado de homogeneidad entre cepas intrapacientes. Por lo tanto, los aislados de E. faecalis, P. putida y C. acnés en dientes con infecciones endodónticas persistentes presentan cepas monoclonales entre sí en un mismo paciente como en diferentes pacientes, así como policlonalidad entre pacientes. La literatura registra amplia información de E. faecalis en su rol en las infecciones endodónticas persistentes, lo contrario sucede con P. putida y C. acnes por lo que estos resultados aportan información para una mejor comprensión de estas cepas causantes de la patogénesis de las infecciones del conducto radicular.