Dissertação
Isolamento de Bacillus thuringiensis de amostra de solo e sua toxicidade sobre trofozoítos de Acanthamoeba castellanii
Registro en:
SANTOS, Edclecia Nascimento. Isolamento de Bacillus thuringiensis de amostra de solo e sua toxicidade sobre trofozoítos de Acanthamoeba castellanii. 2018. Dissertação (Mestrado em Biologia Parasitária) - Universidade Federal de Sergipe, São Cristóvão, 2018.
Autor
Santos, Edclecia Nascimento
Institución
Resumen
Bacillus thuringiensis is a Gram-positive non-pathogenic spore-forming bacterium
found in different habitats such as soils, plants, dead insects and marine
sediments. This bacterium is the producer of several types of secondary
metabolites with toxic activity, among them are the crystals of δ-endotoxin
produced during sporulation. These proteins are called insecticidal crystal proteins
(ICPs) and are distributed in two families: Cry and Cyt. Cry presents toxicity to a
wide range of invertebrate organisms and also human cancer cells. B.
thuringiensis is thus widely used as a bioinsecticide. Protozoa represent one of the
target groups of these toxins, but with studies still scarce. The protozoan
Acanthamoeba castellanii is a free-living amoeba, potentially pathogenic and
causes diseases such as amoebic keratitis and granulomatous encephalitis
amoebic, an illness difficult to diagnose and without specific drugs. This work
aimed to isolate strains of B. thuringiensis from the soil and to characterize the Cry
toxins encoded by them through toxicity tests against A. castellanii trophozoites. A
total of 15 soil samples from different regions of the state were collected, and 150
bacillus like isolates were selected based on their morphological
characteristics.After the analysis under microscope, 75 strains withgreater
sporulation and presence of parasporal proteins were selected for bioassay. A
total of three isolates 66, 69 and 75, showed high amebicidal activity against A.
castellanii. After 48 h of interaction between protein and protozoa, the samples
presented between 96.24 and 97.8% of cell death in the concentrations of 50 - 100
μg / mL. Under these conditions, the isolates presented IC50 values of 4.1, 4.35
and 8.3 μg/mL, respectively. Our results show that these proteins from B.
thuringiensis exerts an amebicidal effect on trophozoites of A. castellanii. However
it is necessary to carry out more specific studies so that these toxins can be used
as medicine. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram-positivo não-patogênica formadora de
esporos encontrada em diferentes habitats como solos, plantas, insetos mortos e
sedimentos marinhos. Esta bactéria é produtora de diversos tipos de metabólitos
secundários com atividade tóxica, dentre eles os cristais de proteínas δendotoxinas produzidas durante a esporulação. Essas proteínas são
denominadas cristais de proteínas inseticidas (insecticidal crystal proteins - ICPs)
e são distribuídas em duas famílias: Cry e Cyt. As Cry apresentam toxicidade para
uma ampla gama de organismos invertebrados e células humanas cancerígenas;
sendo assim, o B. thuringiensis é amplamente utilizado como bioinseticida. Os
protozoários representam um dos grupos-alvo destas toxinas, porém com estudos
ainda escassos. O protozoário Acanthamoeba castellanii é uma ameba de vida
livre, potencialmente patogênica e que ocasiona doenças como a ceratite
amebiana e a encefalite amebiana granulomatosa, enfermidade de difícil
diagnóstico e sem medicamentos específicos. Este trabalho objetivou isolar cepas
de B. thuringiensis do solo e caracterizar as toxinas Cry através de ensaios de
toxicidade sobre trofozoítos de A. castellanii. Foram obtidas 15 amostras de solo
de diferentes regiões do nordeste brasileiro, cultivado e separado em 150 isolados
que foram selecionados a partir das características morfológicas das colônias.
Após as análises das lâminas foram selecionadas 75 isolados de maior
esporulação e presença de proteínas para o ensaio de toxicidade. Um total de
três isolados, 66, 69 e 75, apresentaram atividade amebicida sobre à A.
castellanii. Após 48 h de interação entre proteína e protozoário, as amostras
apresentaram entre 96,2 a 97,8% de morte celular nas concentrações de 50 a 100
µg/mL. Nestas condições, os isolados apresentaram valores de IC50 de 4.1, 4.35 e
8.3 µg/mL, respectivamente. As proteínas de B. thuringiensis exerceram um efeito
amebicida sobre trofozoítos de A. castellanii, no entanto, faz-se necessária a
realização de estudos mais específicos, assim como teste de citotoxicidade para
células de mamíferos, para que estas toxinas venham a ser utilizadas como
medicamento. São Cristóvão