Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Miosinas e dineínas são motores moleculares que usam a energia do ATP para gerar força para O movimento ao longo de filamentos de actina ou polímeros de microtúbulos. Dados de imunolocalização demonstraram a presença das proteínas motoras cinesina, dineína e miosinas na superfície da membrana do Golgi ou de vesículas derivada do Golgi dos fotorreceptores de Apis mellifera. Devido a este dado e à alta capacidade de aprendizado e memória, as abelhas constituem um modelo interessante para investigação genética e bioquímica de motores moleculares associados ao transporte intracelular polarizado de organelas e vesículas em neurônios. O objetivo do trabalho foi a identificação de motores moleculares em cérebro de operárias de Apis mellífem bem como o isolamento do gene de DLC em biblioteca de c—DNA do cérebro destas abelhas. O cérebro de abelhas operárias foram homogeneizados em tampão de extração de miosina-V. Os imunoblots foram revelados por quimioluminescência e detectaram a presença de miosinas V e VI e cadeias leves e intermediárias de dineínas. Os clones de cDNA codificando DLC foram isolados da biblioteca de cérebro de A. mellifera utilizando anticorpo policlonal de coelho que previamente detectaram esta proteína em extratos protéicos totais de cérebro da abelha. A biblioteca foi construída no vetor de expressão lambda-ZAP, principiada com primers de oligo—dT. Para inoculação das células hospedeiras (E. coli linhagem BB4), as mesmas foram incubadas com a biblioteca titulada de modo a se formarem aproximadamente 5.000 placas de lise por placa de petri“. Isolamos os clones e procedemos a retransfecção, até que as placas de petri mostrassem exclusivamente clones codificando a proteina-alvo. Estes clones foram excisados do fagomídeo e amplificados por PCR. Estes resultados sugerem que os domínios reconhecidos tenham sido conservados durante a evolução, uma vez que os anticorpos foram gerados contra proteínas de vertebrados. O isolamento de clones irnunoreativos mostra a expressão na biblioteca utilizada da DLC. Desse modo abre—se perspectiva para o sequenciamento do gene da cadeia leve de dineína em himenópteros. Em estudos futuros, a presença de proteinas motoras em abelhas poderiam tentar explicar a complexidade do sistema neural deste inseto.