Tese
Proteoma nuclear e micro-RNAs de espermatozoides de bovinos férteis e subférteis
Proteome nuclear and micro-RNAs of sperm from fertile and subfertile cattle
Registro en:
Autor
Silva, Ricardo Tomaz da
Institución
Resumen
SUMMARY - Understanding the composition and physiology of spermatozoa is important to
understand transient or permanent subfertility in bulls. Thus, the objective of this work was to
evaluate the nuclear and micro-RNA spermatozoa of fertile and subfertile cattle, in an attempt
to identify molecular markers of fertility and subfertility in bulls. For the evaluation of micro-
RNAs the RNA-seq methodology was used and for nuclear proteins the advanced mass
spectrometry of semen samples from fertile and subfertile bulls was used. A total of 1306
micro-RNAs were identified in the semen samples evaluated. The bta-miR-380-5p, bta-miR-
155, bta-miR-122, bta-miR-30c and bta-miR-34a genes were identified by computational
analysis as being differentially expressed in fertile and subfertile bulls, indicating that they
can set up possible fertility markers. However, it was clear that there is no single micro-RNA
that marks different types and causes of subfertility. As for the nuclear proteins, it was
possible to verify that spermatozoa of bull have in the constitution of their protamine
chromatin 1 and 2, as well as the histone variations subH2Bv, H2A.J, H2A.2C, H4, H2B.1,
H1.2, H2A .Z, H3.1, H3.3C, H3.3C-like, H1.3, H3.3, H3.2. Among nuclear proteins and
contaminants from other sperm and seminal plasma compartments, the acyl thioesterase 1
protein (APT-1), nerve growth factor beta (Beta-NGF), seminal plasma protein A3 ( BSP-3),
Histone H2A.J, FAM71D protein, 40S-S8 and 60S-L9 ribosomal proteins, the plasma serine
protease inhibitor (Protein C inhibitor) (Serpin A5) and the catalytic alpha subunit of the
cAMP-dependent protein kinase as having potential to be used as a fertility marker. On the
other hand, the ATPase protein of the transitional endoplasmic reticulum, subunit 5 of NADH
dehydrogenase (ubiquinone) of subcomplex 1 alpha, beta-9 heat shock protein, ribosomal
proteins 60S-L12 and 40S-S7 and acetyl-CoA protein acetyltransferase presented potential to
be used as subfertility markers. Tese (Doutorado) RESUMO - A compreensão da composição e fisiologia do espermatozoide é importante para
compreender a subfertilidade transitória ou permanente em touros. Assim, objetivou-se com
este trabalho avaliar as proteínas nucleares e micro-RNAs de espermatozoides de bovinos
férteis e subférteis, na tentativa de se identificar marcadores moleculares de fertilidade e
subfertilidade em touros. Para a avaliação de micro-RNAs foi utilizada a metodologia de
RNA-seq e para as proteínas nucleares foi utilizada a espectrometria de massas avançada de
amostras de sêmen de touros férteis e subférteis. Foram identificados 1306 micro-RNAs nas
amostras de sêmen avaliadas. Identificou-se por análises computacionais os genes bta-miR-
380-5p, bta-miR-155, bta-miR-122, bta-miR-30c e bta-miR-34a como sendo diferencialmente
expressos em touros férteis e subférteis, indicando que estes podem configurar possíveis
marcadores de fertilidade. No entanto, ficou claro que não existe um micro-RNA único que
marque diferentes tipos e causas de subfertilidade. Quanto às proteínas nucleares, foi possível
verificar que espermatozoides de touro possuem na constituição de sua cromatina protamina 1
e 2, assim como as variações de histona subH2Bv, H2A.J, H2A.2C, H4, H2B.1, H1.2, H2A.Z,
H3.1, H3.3C, H3.3C-like, H1.3, H3.3, H3.2. Dentre proteínas nucleares, contaminantes de
outros compartimentos do espermatozoide e do plasma seminal, identificou-se a proteína
Acil-tioesterase 1 (APT-1), o fator beta de crescimento do nervo (Beta-NGF), a proteína do
plasma seminal A3 (BSP-3), a Histona H2A.J, a proteína FAM71D, as proteínas ribossomais
40S-S8 e a 60S-L9, o inibidor de serina protease plasmática (Protein C inhibitor) (PCI)
(Serpin A5) e a subunidade alfa catalítica da proteína quinase dependente de cAMP como
tendo potencial para serem utilizadas como marcadoras de fertilidade. Já a proteína ATPase
do reticulo endoplasmático transicional, a subunidade 5 da NADH desidrogenase
(ubiquinona) do subcomplexo 1 alfa, a proteína de choque térmico beta-9, as proteínas
ribossomais 60S-L12 e 40S-S7 e a proteína acetiltransferase do acetil-CoA apresentaram
potencial para serem utilizadas como marcadoras de subfertilidade.