Tese
Caracterização de peptídeos recombinantes associados à brucelose bovina e suas aplicações diagnósticas e vacinais
Registro en:
SANTOS, Fabiana de Almeida Araújo. Caracterização de peptídeos recombinantes associados à brucelose
bovina e suas aplicações diagnósticas e vacinais. 2011. 103 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011.
Autor
Santos, Fabiana de Almeida Araújo
Institución
Resumen
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Doutor em Genética e Bioquímica CAPÍTULO 2: A brucelose bovina é uma doença com grande impacto na produção animal e de
repercussão na saúde humana. Estimativas mostram que a brucelose é
responsável pela diminuição na produção de leite e de carne e pela redução da
produção de bezerros. Apesar de testes diagnósticos oficiais e sensíveis serem
utilizados, ainda não se tem um teste sorológico ideal para todas as situações
epidemiológicas, pois são trabalhosos, complexos e de alto custo. Em relação às
vacinas, buscam-se formulações vacinais protetoras diversas e que não interfiram
no diagnóstico, mas somente as vacinas vivas atenuadas são efetivamente
utilizadas nos programas de controle da brucelose. Neste trabalho, peptídeos
recombinantes foram selecionados pela técnica de phage display, após três ciclos
de seleção, utilizando uma biblioteca comercial Ph.D.-C7C contra anticorpos
policlonais de animais positivos para brucelose. Nove clones foram selecionados,
sequenciados, traduzidos. Dois peptídeos foram sintetizados quimicamente e
verificamos suas potenciais aplicações diagnósticas e vacinais. Os peptídeos
foram testados por ELISA com 80 soros positivos e negativos, e apresentaram
uma sensibilidade de até 97,5% na detecção de anticorpos circulantes de animais
com brucelose. Visando aplicação diagnóstica, o peptídeo Ba9 foi imobilizado
sobre um eletrodo de grafite modificado com poli (3-HFA) e medidas voltamétricas
foram realizadas na presença de soro positivo e negativo, que mostraram ser
altamente efetivo para discriminar animais doentes, resultando em uma técnica
simples, rápida e reprodutível podendo futuramente ser realizada em laboratórios
ou em campo. Quanto aos ensaios vacinais em camundongos imunizados com
extratos protéicos e a bactéria irradiada, demonstrou-se que as formulações
vacinais com os peptídeos induziram uma resposta imune celular baseada na
produção de TNFα, bem como uma resposta humoral com altos níveis de IgG2a e
IgG1, sugerindo um provável efeito protetor, o que deve ser comprovado com
infecção ativa em ensaios biológicos posteriores.