Dissertação
Xanthomonas spp. associadas à mancha bacteriana do tomateiro em Minas Gerais e seu controle por suspensão inativada do patógeno
Xanthomonas spp. associated to tomato bacterial spot in Minas Gerais and its control by inactivated suspension of the pathogen
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Autor
Sá, Gislaine Nascimento Vieira de
Institución
Resumen
Tomato bacterial spot, caused by species of Xanthomonas genus: X. euvesicatoria pv.
euvesicatoria (Xee), X. hortorum pv. gardneri (Xhg), X. euvesicatoria pv. perforans (Xep)
and X. vesicatoria (Xv), is one of the main bacterial diseases of the crop, as it significantly
reduces production. Biochemical and molecular methods allow characterization, distinction
between species, and assessment of the degree of genetic variation within populations.
Chemical control of the disease is not eficiente, and alternative control measures should be
assessed. The objectives of the work were (i) to characterize morphology, biochemical and
molecularly 29 isolates obtained from tomato plants with bacterial spot symptoms collected in
Espírito Santo and Minas Gerais; (ii) to evaluate the control of tomato bacterial spot using
inactivated bacterial suspension, in preventive and curative applications. Species
identification was performed by PCR, using specific primers. The genetic diversity was
evaluated by rep-PCR using similarity dendrogram. Inactivated suspensions of X. hortorum
pv. gardneri were used in preventive and curative application to control tomato bacterial spot.
Inactivated of bacterial suspensions (IBS) were obtained by: exposure to ultraviolet light
radiation (IBS-UV); autoclave sterilization (IBS-E); aging in culture medium (IBS-MC); and
aging of the suspension on the laboratory bench (IBS-S). In the first assay, plants were
preventively sprayed with the IBSs, copper hydroxide, acibenzolar-S-methyl (ASM) and
water (control), and two days later were inoculated with the pathogenic bacterial suspension
(108 and 109 CFU mL-1). In the curative application, the plants were inoculated with the
pathogenic bacterial suspension and two days later, sprayed with the products. In the second
assay, the plants were preventively sprayed with IBS-UV (108 CFU mL-1) and IBS-E (108 and
109 CFU mL-1), copper hydroxide, ASM and water. After two days, were inoculated with the
bacterial suspension (107 and 108 CFU mL-1). Disease severity was assessed and the Area
Under the Disease Progress Curve (AUDPC) was calculated. All isolates showed biochemical
characteristics of Xanthomonas and 12 unidentified isolates did not show typical colony
morphology. Only 17 isolates were identified at species level, one as Xee, 14 as Xep and two
as Xhg. Rep-PCR analyses revealed high genetic diversity among the isolates, the groups
formed did not show a direct relationship with the species, colony morphology, biochemical
characterization, or geographic location. In the first and second assay, in preventive
application, IBS-UV, IBS-E and ASM significantly reduced disease severity. In the first
assay, in the curative application there was no significant difference between the products.
IBS-UV and IBS-E effectively controlled tomato bacterial spot in the preventive application,
reducing the disease severity. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Dissertação (Mestrado) A mancha bacteriana do tomateiro, causada por espécies do gênero Xanthomonas: X.
euvesicatoria pv. euvesicatoria (Xee), X. hortorum pv. gardneri (Xhg), X. euvesicatoria pv.
perforans (Xep) e X. vesicatoria (Xv), é uma das principais doenças bacterianas da cultura,
pois reduz significativamente a produção. Métodos bioquímicos e moleculares permitem a
caracterização, distinção entre espécies e a avaliação do grau de variação genética dentro das
populações. O controle químico da mancha bacteriana não é eficiente e medidas alternativas
de controle devem ser avaliadas. Os objetivos do trabalho foram (i) caracterizar 29 isolados
obtidos de tomate mesa com sintomas de mancha bacteriana coletados no Espírito Santo e
Minas Gerais; (ii) avaliar o controle da mancha bacteriana do tomateiro utilizando a
suspensão bacteriana inativada em aplicações preventiva e curativa. A identificação das
espécies foi realizada por PCR, utilizando primers específicos. A diversidade genética foi
avaliada por rep-PCR, a partir do dendrograma de similaridade. As suspensões inativadas de
X. hortorum pv. gardneri foram utilizadas em aplicação preventiva e curativa para o controle
da mancha bacteriana do tomateiro. As inativações das suspensões bacterianas (SBI) foram
obtidas por: exposição à radiação de luz ultravioleta (SBI-UV); esterilização em autoclave
(SBI-E); envelhecimento em meio de cultura (SBI-MC); e envelhecimento da suspensão em
bancada de laboratório (SBI-S). No primeiro ensaio, as plantas foram pulverizadas
preventivamente com as SBIs, hidróxido de cobre, acibenzolar-S-metil (ASM) e água
(testemunha), e dois dias após foram inoculadas com a suspensão bacteriana patogênica (108 e
109 UFC mL-1). Na aplicação curativa, as plantas foram inoculadas com a suspensão
bacteriana patogênica e dois dias após pulverizadas com os produtos. No segundo ensaio, as
plantas foram pulverizadas preventivamente com as SBI-UV (108 UFC mL-1) e SBI-E (108 e
109 UFC mL-1), hidróxido de cobre, ASM e água. Após dois dias foram inoculadas com a
suspensão bacteriana (107 e 108 UFC mL-1). A severidade da doença foi avaliada e calculada a
Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença (AACPD). Todos os isolados apresentaram
características bioquímicas de isolados do gênero Xanthomonas e 12 isolados não
identificados não apresentaram morfologia das colônias típicas. Apenas 17 isolados foram
identificados quanto à espécie, sendo um como Xee, 14 como Xep e dois como Xhg. As
análises de rep-PCR revelaram alta diversidade genética entre os isolados, os grupos
formados não apresentaram relação direta com as espécies, morfologia das colônias,
caracterização bioquímica ou localização geográfica. No primeiro e no segundo ensaio, em
aplicação preventiva os produtos SBI-UV, SBI-E e ASM reduziram significativamente a
severidade da doença. No primeiro ensaio, na aplicação curativa não houve diferença
significativa entre os produtos. As SBI-UV e SBI-E foram eficazes em aplicação preventiva
para o controle da mancha bacteriana do tomateiro, reduzindo a severidade da doença.