Dissertação
Imunossensor reutilizável para a detecção de proteína c-reativa em soro humano
Proposal of a reusable immunosensor for detection of C-reactive protein in human serum
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Autor
Ribeiro, Sandro Henrique Dias
Institución
Resumen
C-reactive protein (CRP) is an important marker of inflammatory process and / or tissue injury and is associated with the development of cardiovascular diseases, especially in the formation of atherosclerotic plaque. Its serum levels are useful in monitoring inflammatory activity, in treatment and clinical evolution, and in detecting post-operative infectious complications. Thus, the quantification of CRP is of extreme clinical importance to aid in the diagnosis and minimization of disease worsening. Biosensors are potential alternatives to existing conventional diagnostic methodologies, especially for low cost, speed, accuracy, specificity and portability. This work describes the preparation of a reusable electrochemical immunosensor based in modified carbon electrode with reduced graphene oxide and polytyramine for the detection of C-reactive protein (CRP) in serum. This immunosensor was able to distinguish different concentrations of CRP in enriched serum and serum from human patients by differential pulse voltammetry, with a detection limit of 0.37 μg mL-1 and quantification limit of 1.25 μg mL-1. Analyses by atomic force microscopy, scanning electron miscroscopy and electrochemical impedance spectroscopy corroborated with voltammetric analysis. The immunosensor showed selectivity, regeneration capacity and stability, about 90% for 50 days of storage, also allowing the comparison of the CRP levels obtained with the laboratory data and, therefore, a promising platform for quantification of CRP in point-of- care. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Dissertação (Mestrado) A proteína C reativa (CRP) é um importante marcador de processo inflamatório e/ou lesão tecidual e está associado ao desenvolvimento de doenças cardiovasculares, em especial na formação da placa aterosclerótica. Seus níveis séricos são úteis no monitoramento da atividade inflamatória, no tratamento e na evolução clínica, bem como nas detecções de complicações infecciosas pós-operatórias. Sendo assim, a quantificação de CRP é de extrema importância clínica para o auxílio no diagnóstico e minimização de agravamento de doenças. Os biossensores são alternativas em potencial frente às metodologias convencionais existentes de diagnóstico, principalmente pelo baixo custo, rapidez, precisão, especificidade e portabilidade. Assim, este trabalho descreve a preparação de um imunossensor eletroquímico reutilizável baseado em eletrodo de carbono modificado com óxido de grafeno reduzido e politiramina para a detecção da proteína C reativa no soro humano. Este imunossensor foi capaz de distinguir diferentes concentrações de CRP em soro e soro enriquecidos de pacientes humanos por voltametria de pulso diferencial, com limite de detecção de 0,37 μg mL-1 e limite de quantificação de 1,25 μg mL-1. Análises por microscopia de força atômica, microscopia eletrônica de varredura e espectroscopia de impedância eletroquímica corroboraram com a análise voltamétrica. O imunossensor apresentou seletividade, capacidade de regeneração e estabilidade, cerca de 90% por 50 dias de armazenamento, permitindo ainda a comparação dos níveis de CRP obtidos com os dados laboratoriais sendo, portanto, uma plataforma promissora para quantificação de CRP em point-of-care.