Disserta????o
Obten????o, caracteriza????es estruturais e atividade enzim??tica do s??tio C-catal??tico da enzima conversora de angiotensina I - regi??o ALAsup(959) at?? SERsup(1066)
Obtaining, structural characterization and enzymatic activity of the C catalytic site of angiotensin convertin enzyme I ALA959 to SER1066 region
Registro en:
10.11606/D.85.2015.tde-23112015-083845
Autor
ELIAS, CAROLINE C.
Resumen
A enzima conversora de angiotensina (ECA) catalisa a convers??o de angiotensina I (Ang I) no vasoconstritor angiotensina II (Ang II) e hidrolisa a bradicinina (BK). ECA som??tica (sECA) possui dois dom??nios hom??logos (N e C) que t??m 60% de identidade. Embora estas duas regi??es tenham homologia grande, o s??tio catal??tico C-dom??nio exibe uma atividade tr??s vezes maior do que o N-dom??nio na hidrolise de Ang I in vivo. Este fato torna interessante o desenvolvimento de novos estudos de inibidores ou a melhoria dos j?? existentes. O objetivo deste estudo foi obter a regi??o Ala959 at?? Ser1066 do Cdom??nio da sECA (c-sECA), em uma estrutura conformacional semelhante ?? estrutura nativa. N??s amplificamos a sequ??ncia correspondente ao s??tio catal??tico da c-sECA com 324pb e clonamos esta sequ??ncia no vetor pET 28a(+). O segmento (nomeado de pET28_c-sECA) foi expresso em sistema bacteriano. A prote??na foi expressa na forma sol??vel e a purifica????o foi feita em uma ??nica etapa utilizando a coluna de afinidade His-tag, a qual produziu a prote??na pura. An??lises estruturais por dicro??smo circular e fluoresc??ncia confirmaram que a prote??na recombinante estava na conforma????o correta, e os ensaios de atividade mostraram que a c-sECA possui atividade enzim??tica e ?? inibida por lisinopril. Disserta????o (Mestrado em Tecnologia Nuclear) IPEN/D Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP