Artículo de revista
Immunolocalization of Morphogen Sonic Hedgehog in Salmon Fry (Salmo salar)
Inmunolocalización de Morphogen Sonic Hedgehog en alevines de salmón (Salmo salar)
Registro en:
0717-9502
0717-9367
10.4067/S0717-95022016000200054
DR2RH
WOS:000379751100054
Autor
Rojas, Mariana
Saint-Pierre, Gustavo
Hartley, Ricardo
Vasquez, Belgica
Conei, Daniel
del Sol, Mariano
Institución
Resumen
With the purpose of carrying out a diagnosis of the different pathologies that affect the salmon fry stage (Salmo salar) and analyze the regeneration phases of the organizational centers and subjacent tissue in case of an amputation, we realized a study that allowed identifying the temporary and spatial location of the Sonic Hedgehog (Shh) morphogen in hatched fry stage. Fifteen salmon fry (Salmo salar) were used. They were anesthetized with 5% benzocaine (BZ-20 (R), Veterquimica), fixed in 10% buffered formalin, and embedded in paraffin, Shh polyclonal antibody (Santa Cruz H-160, rabbit) was used diluted at 1/100. They were subsequently rinsed in PBS-1% Triton and incubated with anti-rabbit conjugated polymer antibody and HRP for 10-15 min. The development was done with DAB (Vector) for 1-5 min. The negative control was incubated without primary antibody. As an internal positive control the notochord was considered. Serial sagittal sections were analyzed consigning tissues and organs marked positively and were described morphologically. The objective of recognizing the spatial and temporal location of Shh was achieved. The notochord, spinal cord neurons and ganglia, the basal layer of the skin and also the lepidotriquias escleroblastos were positively identified for Shh. Finally positivity was also observed in the intestine and renal tubules. The heterogeneity observed in the location of the Shh morphogen suggests its potential use as a marker of regulatory centers in Salmo salar, and a potential advantage in the diagnosis of malformations of salmon fry stage, in addition to a better understanding of tissue regeneration. Con el fin de realizar un diagnóstico de las distintas patologías que afectan al estadio de alevín del salmón (Salmo salar) y analizar las fases de regeneración de los centros organizativos y tejido subyacente en caso de amputación, se realizó un estudio que permitió identificar los procesos temporales y ubicación espacial del morfógeno Sonic Hedgehog (Shh) en la etapa de alevines eclosionados. Se utilizaron quince alevines de salmón (Salmo salar). Se anestesiaron con benzocaína al 5% (BZ-20 (R), Veterquimica), se fijaron en formalina tamponada al 10% y se embebieron en parafina, se utilizó anticuerpo policlonal Shh (Santa Cruz H-160, conejo) diluido al 1/100. Posteriormente se enjuagaron en PBS-1% Triton y se incubaron con anticuerpo de polímero conjugado anti-conejo y HRP durante 10-15 min. El revelado se realizó con DAB (Vector) durante 1-5 min. El control negativo se incubó sin anticuerpo primario. Como control positivo interno se consideró la notocorda. Se analizaron cortes sagitales seriados consignando tejidos y órganos marcados positivamente y descritos morfológicamente. Se logró el objetivo de reconocer la ubicación espacial y temporal de Shh. La notocorda, las neuronas y ganglios de la médula espinal, la capa basal de la piel y también las lepidotriquias escleroblastos fueron identificadas positivamente para Shh. Finalmente también se observó positividad en intestino y túbulos renales. La heterogeneidad observada en la ubicación del morfógeno Shh sugiere su potencial uso como marcador de centros reguladores en Salmo salar, y una potencial ventaja en el diagnóstico de malformaciones en etapa de alevines de salmón, además de una mejor comprensión de la regeneración tisular.