Dissertation
Avaliação do potencial diagnóstico de novos antígenos de Leishmania infantum em pacientes coinfectados HIV/LV no estado de Pernambuco
Potential assessment of novel Leishmania infantum antigens in co-infected pacients HIV/VL in Pernambuco
Registro en:
RAMOS, Rhaíssa Evelyn Moraes. Avaliação do potencial diagnóstico de novos antígenos de Leishmania infantum em pacientes coinfectados HIV/LV no estado de Pernambuco. 2017. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia em Saúde) – Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2017.
Autor
Ramos, Rhaíssa Evelyn Moraes
Resumen
A associação das infecções causadas pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) e pelo protozoário Leishmania spp. caracteriza a coinfecção Leishmania/HIV-aids, que vem sendo registrada há cerca de duas décadas. A coinfecção LV/HIV-aids emerge como uma doença grave, cujos patógenos podem agir sinergicamente estabelecendo uma infecção de elevado fator de risco quando não diagnosticada ou não tratada, devido à imunossupressão causada por ambas às doenças. A coexistência do HIV e da Leishmania na mesma célula modula essas respostas causando um efeito protetor ou de progressão da doença. Com a finalidade de agilizar o tratamento, reduzindo a mortalidade e morbidade, testes diagnósticos são empregados no diagnóstico da coinfecção. O Ministério da Saúde recomenda a associação dos testes sorológicos, moleculares e exame parasitológico para a definição de coinfecção. Apesar de resultados promissores nos testes diagnósticos, ainda não há um teste sorológico capaz de detectar satisfatoriamente a condição de coinfecção. Estudos acerca dos componentes antigênicos do parasito e do vírus tornam-se essenciais para a compreensão da resposta imune do hospedeiro. Este estudo objetivou avaliar a capacidade de reconhecimento sorológico de cinco proteínas recombinantes de Leishmania infantum em pacientes coinfectados LV/HIV-aids através do método de ELISA indireto. As amostras foram oriundas de biorrepositórios. Os plasmídeos utilizados foram obtidos em trabalhos prévios de colaboradores. Os antígenos foram expressos através de transformação bacteriana em E. coli e purificadas por cromatografia de afinidade utilizando resina comercial de níquel. A avaliação dos antígenos foi realizada através dos testes de Aglutinação Direta (DAT) e do Ensaio Imunoenzimático (ELISA). Dentre os antígenos, os melhores resultados para o diagnóstico da coinfecção LV/HIV-aids com exame parasitológico confirmatório foram os polipeptídeos Lci1, Lci2, Lci10, Lci12 e Lci13, com elevadas sensibilidade e especificidade. Em relação ao grupo sem o exame parasitológico, nenhuma proteína se destacou. Concluiu-se que a K39 comercial se apresentou como a melhor proteína, com sensibilidade e especificidade acima de 80%. FIOCRUZ – Fundação Oswaldo Cruz The association between the infections caused by the human imunodeficiency virus (HIV) and
by the Leishmania spp. protozoan defines the coinfection Leishmania/HIV-aids, that has been
reported around two decades. The co-infection VL/HIV-aids emerges as a very serious
process ORGANIZAÇÃO MUNDIAL DE SAÚDEse pathogens can act synergistically
leading to an infection of highly risk factor when undiagnosed or untreated, due to
immunosuppression caused by both diseases. The coexistence of HIV and Leishmania in the
same cell modulates cellular responses being able to cause protector effect or disease
progression. In order to expedite treatment, reducing mortality and morbidity, diagnostic tests
are used for the diagnosis of coinfection. The Brazilian Ministry of Health recommends the
association of serologic tests, molecular tests and direct search of the parasite for the
definition of coinfection. Despite promising results concerning the tests, there is still no
serological test that can satisfactorily detect the status of coinfection. Studies on the antigenic
components of the parasite as well as the virus become essential for understanding the
immune response of the host. The goal was to evaluate the serologic recognition capabilities
of five recombinant proteins of Leishmania infantum in coinfected patients VL/HIV based on
the indirect ELISA. Samples were derived from a previous biorepository. The utilized
plamids were obteined from previous works. Antigens were expressed by bacterial
transformation in E. coli and purified by affinity chromatography using commercial nickel
resin. The evaluation was conducted through the Direct Agglutination Test (DAT) and the
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Among the antigens, the best for the
diagnosis of LV/HIV-aids co-infection with confirmatory parasitology were the polypeptides
Lci1, Lci2, Lci10, Lci12 and Lci13, which demonstrated highly sensitivity and specificity.
For the group without the confirmatory parasitology test, none of the proteins were good. It
was concluded that the commercial K39 presented as the best protein, with sensitivity and
specificity above 80%. 2018-06-12
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