Dissertation
Papel da caspase-1 na infecção experimental pelo vírus Chikungunya
Role of caspase-1 in experimental Chikungunya virus infection
Registro en:
FARIAS, Pablo Cantalice Santos Farias. Papel da caspase-1 na infecção experimental pelo vírus Chikungunya. 2019. 81f. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia em Saúde) – Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2019.
Autor
Farias, Pablo Cantalice Santos
Resumen
O Chikungunya (CHIKV) é um arbovírus da família Togaviridae, gênero Alphavirus,
transmitido por vetores do gênero Aedes. Os principais sintomas da febre Chikungunya
incluem febre, artralgia severa, mialgia, cefaleia e exantemas, podendo ser detectados
também casos envolvendo complicações neurológicas, como a Síndrome de Guillaín-Barré,
meningoencefalite, mielite entre outras patologias do sistema nervoso central (SNC). Dessa
forma, este trabalho visa identificar o papel da caspase-1 durante infecção pelo vírus
Chikungunya buscando elucidar formas de prevenção às complicações, visto que ainda não
há tratamentos específicos contra o vírus. Inicialmente, a infecção foi realizada em células de
linhagem neuronal (SH-SY5Y) utilizando um MOI de 0,5. Para confirmação da infecção foi
realizada imunofluorescência utilizando anticorpos específicos anti-CHIKV nos tempos de
12, 24, 36 e 48 horas pós infecção (hpi). Nas mesmas condições foi avaliada a cinética de
replicação do vírus por meio de ensaio de placa, onde foi observado um pico da replicação
em 36 hpi. Ainda sob o contexto celular foi realizado o ensaio de morte celular, utilizando
anexina V/7AAD, pelo qual foi observada uma taxa de morte crescente a partir de 36 hpi.
Um dos elementos da via em estudo, a caspase-1, foi marcada nos diferentes tempos
detectando-se uma crescente ativação. Além disso, níveis de IL-1β foram dosados no
sobrenadante observando-se uma diminuição nesses níveis em 36 e 48 hpi. Estudos prévios já
demonstraram que de fato o CHIKV é capaz de infectar e se replicar em SH-SY5Y, porém,
não se tem dados à respeito dos níveis de caspase-1 ativadas em cultura celular. Em relação
aos níveis de IL-1β, torna-se importante avaliar mecanismos anti-inflamatórios que possam
estar envolvidos. O CHIKV é capaz de ativar caspase-1, porém necessita-se de mais estudos
a fim de elucidar mecanismos imunológicos em 36 e 48 hpi. Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco (FACEPE) Chikungunya (CHIKV) is an arbovirus of the family Togaviridae, genus Alphavirus,
transmitted by vectors of the genus Aedes. The main symptoms of Chikungunya fever
include fever, severe arthralgia, myalgia, headache and exanthemas, and cases involving
neurological complications such as Guillaïn-Barré syndrome, meningoencephalitis, myelitis
and other central nervous system (CNS) pathologies may also be detected. Thus, this work
aims to identify the role of caspase-1 during Chikungunya virus infection seeking to elucidate
ways of preventing complications, since there are still no specific treatments against the
virus. Initially, the infection was performed on neuronal lineage cells (SH-SY5Y) using a
MOI of 0.5. For confirmation of infection, immunofluorescence was performed using
specific anti-CHIKV antibodies at times of 12, 24, 36 and 48 hours post infection (hpi).
Under the same conditions the kinetics of virus replication was evaluated by plaque assay,
where a replication peak was observed at 36 hpi. Still under the cellular context was carried
out the cell death assay, using annexin V / 7AAD, for which a growing death rate was
observed from 36 hpi. One of the elements of the pathway under study, caspase-1, was
marked at different times by detecting increased activation. In addition, IL-1β levels were
measured in the supernatant, with a decrease in these levels by 36 and 48 hpi. Previous
studies have shown that in fact CHIKV is capable of infecting and replicating in SH-SY5Y,
however, no data are available on activated caspase-1 levels in cell culture. Regarding IL-1β
levels, it becomes important to evaluate anti-inflammatory mechanisms that may be involved.
CHIKV is able to activate caspase-1, but further studies are needed to elucidate
immunological mechanisms at 36 and 48 hpi.
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