Dissertation
Micropartículas derivadas de monócitos como potenciais direcionadoras de mieloperoxidase para superfície endotelial
Registro en:
SANTOS, Thayna Meirelles. Micropartículas derivadas de monócitos como potenciais direcionadoras de mieloperoxidase para superfície endotelial. 2009. 73 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) - Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador, 2009.
Autor
Santos, Thayna Meirelles
Resumen
A Mieloperoxidase (MPO) é uma enzima catiônica presente nos grânulos azurófilos de neutrófilos e monócitos responsável pela formação de espécies reativas de oxigênio (ROS) envolvidas na diminuição da biodisponibilidade do NO, modulando a resposta inflamatória vascular. Micropartículas (MPs) são vesículas derivadas da membrana plasmática, durante ativação celular ou apoptose, e atuam como mensageiras intercelulares por interação específica com as células alvo. MPs de diversas origens parecem afetar a função vascular por mecanismos dependentes do estresse oxidativo. MPs derivadas de monócitos humanos (MoMPs) foram produzidas por ativação celular in vitro com ionóforo de cálcio e caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas delimitadas por bimembrana lipídica e diâmetro característico menor que 111m. Detectamos por quimioluminescência, em reação dependente de luminol e H202, inibida por azida sódica, atividade de mieloperoxidase associada às MoMPs. A exposição das MoMPs a pH 10,7 ou ao aumento da força iônica do meio resultou em dissociação da MPO da sua superfície, enquanto nenhuma dissociação ocorreu após exposição a pH 3,0, demonstrando que esta associação depende de interações eletrostáticas. A MPO não foi capaz de religar-se nas MoMPs após tratamento com pH 10,7, indicando a necessidade de uma determinada distribuição de cargas na superfície das MoMPs. Além disso, não foi capaz de se ligar na superfície de linfócitos e hemácias, sugerindo a participação de molécula(s) específica(s) nas MoMPs responsáveis por esta interação. Identificamos a expressão das integrinas LF A-I e MAC-I na superfície das MoMPs ricas em MPO por citometria de fluxo, demonstrando seu potencial em aderir especificamente à superfície do endotélio ativado. Estes resultados sugerem que as MPs derivadas de monócitos podem atuar como carreadoras da MPO para superfície endotelial, sugerindo assim sua contribuição na disfunção do endotélio vascular. The myeloperoxidase (MPO) is a cationic enzyme present in azurophilic granules of neutrophils and monocytes. This enzyme is responsible for the formation of reactive oxygen species (ROS) involved in decreased NO bioavailability and modulates the
vascular inflammatory response. Microparticles (MPs) are shed membrane vesicles arising from cell activation or apoptosis, and act as intercellular messengers, specifically interact with target cells. MPs from various cells could affect vascular function through mechanisms triggered by oxidative stress. Monocytes derived MPs (MoMPs) were
obtained from calcium ionophore activated human monocytes in vitro and characterized by transmission electron microscopy as vesicles bounded by bilayer lipid membrane and diameter less than 1 Km. We detected by chemiluminescence MPO activity MoMPs associated, by luminol with added H2O2 and inhibited by sodium azide. Treating of
MoMPs with buffer at pH 10.7 or increased ionic strength resulted in releasing of the MPO from the MPs surface, whereas no release occurred with buffer at pH 3.0, demonstrating that nature of association between MPO and these MPs is electrostatic. MPO was not able to re-attach to MoMPs after treatment with pH 10.7, indicating the
need for a specific charge distribution on the MoMPs surface. Moreover, MPO was not able to bind on the lymphocytes and erythrocytes surface, suggesting the involvement of specific (s) molecule (s) in MoMPs responsible for this association. We identified the expression of integrins LFA-1 and MAC-1 on the MPO enrich MoMPs surface by flow
cytometry, demonstrating their potential to adhere specifically to activated endothelium adding the MPO to them, suggesting their contribution to endothelial dysfunction.