Avaliação da associação entre S- nitroso- N- acetil -DL- penicilamina e cloreto férrico na indução da morte celular imunogênica em linhagem celular de câncer colorretal humano

Abstract

Agentes quimioterápicos, embora sejam eficazes na eliminação de determinados tipos de tumores, dependendo da concentração, podem causar citotoxicidade contra células não tumorais e severos efeitos colaterais. Novas estratégias de tratamentos mais eficientes e específicos se mostram necessárias frente a estes desafios. A indução da morte celular imunogênica (MCI) em células tumorais por alguns quimioterápicos é uma alternativa viável. A MCI é caracterizada pela externalização e liberação de padrões moleculares associados ao dano (DAMPs), como a proteína calreticulina (CRT), que é translocada do retículo endoplasmático (RE) para a membrana plasmática (MP) e externalizada para a porção extracelular. Além disso, há a liberação da proteína nuclear de alta mobilidade B1 (HMGB1) e do nucleotídeo adenosina trifosfato (ATP) para o meio extracelular. O quimioterápico Oxaliplatina (OXP) é capaz de induzir MCI. O doador de óxido nítrico (NO), nitroprussiato de sódio (SNP), um complexo Ferro-nitrosil, é capaz de promover a translocação e externalização de CRT e induzir a MCI. Assim, propusemos que outro doador de NO, o S-nitrosotiol, S- nitroso- N- acetil- DL- penicilamina (SNAP) em combinação com cloreto férrico (SNAP + FeCl3), pudesse fazer o mesmo. Inicialmente, investigamos nestas células a possibilidade de que a OXP, SNP e SNAP + FeCl3 poderiam alterar as expressões dos mRNA codificadores para as proteínas do metabolismo de ferro, o receptor de Transferrina (TFRC) e as cadeias leve (FTL) e pesada (FTH1) da Ferritina e assim promover a MCI. Nossos resultados não mostraram alterações importantes nos níveis de expressão dos mRNA codificadores para as proteínas analisadas. Investigamos então a possibilidade de que a OXP, SNP e SNAP + FeCl3 pudessem atuar diretamente sobre as células SW480 e promover a externalização dos DAMPs associados a MCI, mencionados acima. Nossos resultados evidenciaram que OXP e a associação SNAP + FeCl3 não promoviam perda de viabilidade nem induziam morte por apoptose/necrose durante os períodos de tratamento das células. Os dois tratamentos foram capazes de promover a translocação da CRT para o citoplasma e para a MP das células SW480. Ambos os tratamentos promoveram uma diminuição da expressão de HMGB1 nestas células, sugerindo que HMGB1 possa ter sido liberada para o meio extracelular. Por fim, estes tratamentos também promoveram liberação de ATP para o meio extracelular. Concluímos nossas observações sugerindo que compostos como OXP, SNP e a associação SNAP + FeCl3 por apresentarem em sua composição metais de transição são capazes de induzir um estresse oxidativo moderado que por sua vez pode promover a externalização e liberação de DAMPs associados a MCI.