Los AINEs (anti-inflamatorios no-esteroidales) son un grupo de fármacos que tienen en común una acción anti-inflamatoria, anti-pirética i analgésica. Su mecanismo de acción involucra la inhibición de la enzima COX-2, responsable de la síntesis de prostaglandinas pro-inflamatorias. Aunque más de 30 millones de personas consumen AINEs diariamente en el mundo, su uso está frecuentemente asociado a efectos colaterales. Éstos comprenden, principalmente, lesiones a nivel del tracto gastrointestinal (GI). Entre los Al N Es que presentan mayor incidencia de efectos adversos a dicho nivel se encuentra la indometacina (INDO). En atención a esto último, INDO es ampliamente utilizada como droga-modelo para inducir a nivel experimental toxicidad Gl. Si bien la toxicidad de INDO está parcialmente asociada a la inhibición de la isoforma 1 de la ciclooxigenasa (COX-1), responsable de sintetizar prostanoides con acciones gastroprotectoras, recientemente se ha postulado que adicionalmente, la toxicidad Gl de INDO implicaría al estrés oxidativo como un factor clave en la etiología del daño celular, tisular y funcional inducido por este agente. En virtud de lo anterior, se ha planteado que compuestos con propiedades antioxidantes podrían ser de utilidad en el manejo de las complicaciones Gl asociadas al uso de INDO. Los polifenoles, presentes en abundancia en frutas y verduras, constituyen el grupo de compuestos antioxidantes más consumido por la población. Entre diversas fuentes de antioxidantes, la cáscara de manzana, destaca por su particularmente alto contenido polifenólico. En relación a esto último, en nuestro laboratorio se desarrolló un extracto de cáscara de manzana rico en polifenoles (APPE) cuya composición ha sido plenamente estandarizada. Atendiendo al potencial antioxidante que podría suponer la alta concentración de polifenoles en APPE, en el presente proyecto se evaluó la siguiente hipótesis de que "el uso del extracto referido disminuye las alteraciones celulares y funcionales asociadas al daño oxidativo inducido por indometacina a nivel digestivo". Para abordar la validez de esta hipótesis, células Caco-2 fueron expuestas a INDO y diversos parámetros de daño oxidativo, mitocondrial y celular, potencialmente relevantes como causa del daño Gl observado in vivo, fueron estudiados. INDO indujo, en función del tiempo y de su concentración, perturbaciones mitocondriales y oxidativas que condujeron a la pérdida de viabilidad celular. Tras tan solo 10 min de exposición, INDO inhibió la actividad del complejo 1, resultando en un incremento en el 02· · mitocondrial y en una caída de los niveles de ATP celular. Estos tempranos efectos fueron seguidos de un aumento, a nivel citosólico, en la producción de 02·· (20 min) y de una elevación (a los 30 min) en la actividad de la enzima xantina oxidasa (XO). Asociado a este último evento, se observó un aumento en la lipoperoxidación (30 min) y una disminución de la viabilidad celular (40 min). El uso de tempol (un SODY catalasa-mimético) y de alopurinol (un inhibidor de XO) permitió establecer que tanto la remoción de los 0 2•· tempranamente generados en la célula como la prevención de la subsiguiente exacerbada formación de éstos, previene tanto la activación de la XO como la lipoperoxidación y pérdida de viabilidad celular que les sucede.· A diferencia de tempol y alopurinol, APPE fue capaz de proteger contra la inhibición del complejo 1, y en consecuencia previno el temprano aumento en la producción de 0 2 •• mitocondrial que desencadena todos los efectos deletéreos de INDO río-abajo. Por lo tanto, el efecto citoprotector de APPE residiría primariamente en su capacidad para prevenir la aumentada formación mitocondrial de radicales 0 2·- al prevenir la inhibición del complejo 1 mitocondrial inducida por INDO. Adicionalmente, APPE promovería una acción citoprotectora en virtud de su capacidad para atrapar diversas especies radicalarias. Habiéndose establecido sus propiedades citoprotectoras in vitro, el efecto protector de APPE fue también estudiado en un modelo in vivo de daño Gl inducido por INDO en ratas. La administración ·de APPE (30 m in antes de la administración de INDO) previno totalmente contra el daño oxidativo (disminuyendo los niveles de lipoperoxidación y aumentando el cuociente glutatión reducido/oxidado) y el daño inflamatorio (disminuyendo la actividad de mieloperoxidasa) inducido por INDO en la mucosa gástrica, duodenal y colónica de los animales. Además, previno la formación de lesiones gástricas, tanto macroscópicas como histológicas. Junto con proteger contra las alteraciones bioquímicas, celulares y tisulares mencionadas, APPE previno por completo las alteraciones de la función de barrera (permeabilidad a diversos biomarcadores) inducidas por INDO a lo largo de todo el tracto Gl. Se espera que estos resultados contribuyan no sólo a caracterizar el espectro de acciones antioxidantes de APPE sino, además, a definir el potencial que dicho preparado podría tener eventualmente como herramienta farmacológica para reducir o atenuar las complicaciones Gis asociadas al uso de éste y otros anti-inflamatorios no esteroidales.PFCHA-BecasDoctor en Farmacología114p.PFCHA-BecasTERMINADA