Tesis Doctorado
Papel fisiólógico del canal ik-1 (kcnn4) en el intestino: estudio de su inactivación genética en ratones
Autor
Flores-Pinilla, Carlos Alejandro
Institución
Resumen
La secreción de agua y electrolitos en el intestino es un proceso altamente organizado y cuyo
desequilibrio puede desencadenar estados fisiopatológicos corno la diarrea secretoria u
obstrucción intestinal severas que pueden llegar a ser letales. El principal componente jónico
de esta secreción es el cloruro, que alcanza el lumen a través de la apertura del canal CFTR
desde las células de las criptas intestinales donde este anión es acumulado sobre equilibrio. El
responsable de la acumulación de cloruro en las células es el triple co-transpotador NKCCI,
que valiéndose de la gradiente favorable al ingreso de sodio acopla la entrada de 1 sodio, 1
potasio y 2 cloruros a la célula. Un requerimiento absoluto para la secreción de cloruro es la
activación paralela de canales de potasio basolaterales que mantienen un potencial de
membrana favorable a la secreción amónica en la membrana apical. Las conductancias
basolaterales de potasio que participan de este proceso se diferencian según el mediador
intracelular que las activa. Existe una conductancia activada por cAMP que ha sido identificado
como el complejo formado por KCNQ1 y KCNE3, pero la identidad del canal de potasio
activado por calcio es materia de controversia.
En este trabajo de tesis hemos usado un animal "knock-o,d' (KO) para e1 canal KCNN4 para
demostrar que este canal de potasio activado por calcio y de conductancia intermedia es el
único de su tipo que participa de la secreción de cloruro activada por calcio en el colon y el
intestino delgado.
Utilizando la cámara de Ussing se evaluó la diferencia de voltaje y resistencia transepiteliales, y
las corrientes de cortocircuito equivalentes, en colon y yeyuno de animales control y KO para
KCNN4. Se colectaron heces de estos animales y se midieron el contenido de agua y cationes.
Finalmente se realizaron técnicas de inmunihistoquímica y análisis de Western para determinar
la distribución de canales KCNMA1 y KCNN4 en el intestino.
En el colon distal y yeyuno de los animales KO para KCNN4 se observó una secreción de
cloruro activada por cAMP similar a la obtenida de animales control. En el caso de la secreción
de cloruro activada por agonistas de calcio, ésta estaba totalmente ausente de los animales KO
para KCNN4. La secreción de potasio activada por calcio, estaba aumentada en los animales
KO para KCNN4, lo que se relaciona con una distribución celular más amplia de canales
KCNMA1 en el colon. El contenido de agua, sodio y potasio estaba disminuido en las heces de
los animales KO para KCNN4.
El uso del animal KO para KCNN4 nos ha permitido demostrar que el canal KCNN4 es
necesario y suficiente para mantener la secreción de cloruro activada por calcio en el intestino.
La disminución del contenido de agua y cationes de las heces de los ratones KO para KCNN4
sugiere que la secreción de cloruro activada por calcio es importante en el mecanismo
involucrado en el control final de la hidratación de las heces que probablemente ocurre en el
colon. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias 97p. PFCHA-Becas TERMINADA