Tesis Doctorado
Papel de adar1p110 en la progresión del cáncer de mama triple negativo a través de la regulación de la vía de señalización wnt canónica.
Autor
Morales-Alonso, Fernanda Nicole
Institución
Resumen
Introducción: El cáncer más diagnosticado en mujeres en el mundo y en nuestro país es el
cáncer de mama, siendo la primera causa de muerte en mujeres chilenas. Entre los distintos subtipos existentes de cáncer de mama, se encuentra el subtipo triple negativo (TNBC, por sus sigles en inglés: “Triple-negative breast cancer”) que es considerado el más agresivo dada su capacidad invasiva y de propagación hacia otras partes del cuerpo. TNBC, es un cáncer heterogéneo que en la actualidad es tratado primordialmente con quimioterapia en sus distintos estadíos. Sin embargo, si bien la quimioterapia es la opción principal, algunos tumores de TNBC generan resistencia a ella. Lo anterior, impulsa a determinar nuevos objetivos terapeúticos para diseñar nuevas estrategias de tratamientos, ya sean dirigidas a blancos específicos o que puedan complementar las terápias existentes. Al respecto, se ha reportado que tumores de pacientes TNBC con mal pronóstico presentan un alto nivel de “Adenosine Deaminases Acting on RNA1” (ADAR1). Adicionalmente, células MDA-MB-231 donde se ha
silenciado ADAR1 pierden su capacidad de generar tumores in vivo; y en cáncer de mama
lobular positivo al receptor α-estrógeno el gen de ADAR1 es uno de los genes mayormente
expresados. Estudios preliminares en nuestro laboratorio usando la línea celular
MDA-MB-231 evidencian un mayor nivel proteico de la isoforma corta p110 de ADAR1, en
relación a su isoforma larga p150. Por otro lado, la disfunción de las moléculas involucradas
en la vía de señalización Wnt canónica también desempeñan un papel importante en la
progresión del cáncer de mama, siendo β-catenina un componente clave de estudio en cáncer.
Por lo anteriormente expuesto, la hipótesis propuesta en este trabajo investigativo fue: “La
isoforma p110 de ADAR1 promueve la activación de la vía Wnt canónica en cáncer de mama triple negativo y como consecuencia un aumento de la progresión maligna tanto in vitro como
in vivo”. El objetivo general fue: Estudiar el mecanismo por el cual la isoforma p110 de
ADAR1 promueve la malignidad in vitro en células de cáncer de mama triple negativo e in
vivo en ratones inmunodeficientes. Los objetivos específicos planteados para abordar este
estudio fueron los siguientes: 1. Estudiar in vitro la función de la isoforma p110 de ADAR1
como regulador positivo de β-catenina en células de cáncer de mama; 2. Evaluar el efecto in
vitro de ADAR1p110 en la proliferación, migración, invasión y angiogénesis en células de
cáncer de mama triple negativo; 3. Estudiar el efecto in vivo de ADAR1p110 en la formación
de tumores y metástasis en ratones inmunodeficientes; y 4. Estudiar el efecto in vivo de
ADAR1p110 (SE) sobre el proceso de neoangiogénesis en tumores subcutáneos.
Metodología: Para responder la hipótesis propuesta se generaron lentiviralmente células
MDA-MB-231 donde se sobreexpresó o silenció ADAR1, junto con sus respectivas células
control (Mock y shControl). Se caracterizó la sobreexpresión (SE) y el silenciamiento de
ADAR1, mediante Western blot y RT-qPCR, para evaluar su abundancia proteica y el nivel de
transcrito, respectivamente. A continuación, la abundancia de diferentes proteínas relacionadas
con la vía Wnt/β-catenina y la actividad de la β-catenina nuclear se analizaron mediante
Western blot y ensayo indicador de luciferasa TOP/FOP-Flash, respectivamente. La migración
e invasión celular se analizaron mediante ensayos funcionales de migración en cámara de
Boyden y ensayos de invasión en matrigel, respectivamente. A continuación, en ratones
BALB/c NOD-SCID inmunodeficientes, estudiamos el comportamiento de tumores generados a partir de células ADAR1p110 (SE) y se analizó la inmunotinción de vascularización tumoral. PFCHA-Becas PFCHA-Becas