Tesis Doctorado
Participación del oxido nítrico y la progesterona en la regulación de la frecuencia de batido ciliar oviductal inducida por el atp
Autor
Kerr-Fuentes, Bredford
Institución
Resumen
En los epitelios mucociliados, las células secretoras de moco y las células ciliadas
forman una unidad morfológica y funcional, encargada de producir, secretar y propulsar una
capa de moco sobre el epitelio. Este mecanismo es conocido como transporte mucociliar, el
cual constituye no sólo un mecanismo de transporte, sino además funciona como una barrera
fisica protectora contra la acción de microrganismos patógenos. Uno de los factores que
regulan el transporte mucociliar es la frecuencia de batido ciliar (FBC). Está descrito, que un
aumento en la FBC incrementa la velocidad de transporte de la capa de moco por sobre el
epitelio. En el oviducto, la FBC no sólo regula el transporte mucociliar, sino que también es
un factor que participa en el transporte de ovocitos y embriones.
Existen señales químicas secretadas por el epitelio oviductal, como las prostaglandinas
y el ATP, que incrementan la frecuencia de batido ciliar (FBC), a través de un aumento en la
concentración de calcio libre intracelular ([Ca 2 ]i), Por otra parte, se ha demostrado que un
dador de óxido nítrico (NO) reduce la producción de prostaglandinas en el epitelio oviductal
de la rata. Sin embargo, se desconoce si el NO puede afectar la FBC oviductal. En el epitelio
de las vías respiratorias, la inhibición de la producción de NO reduce el efecto de ATP sobre la
FBC, disminuyendo el aumento en la [Ca 2 ]i generado por esta señal. Más aún, ha sido
demostrado que el NO ejerce este efecto a través de una vía de transducción que involucra la
participación de la proteína kinase G.
El NO es sintetizado por tres diferentes tipos de NO sintasas (NOSs). Por otra parte, se
ha descrito la participación del NO en un amplio número de funciones en el tracto reproductor de la hembra, y su expresión ha sido descrita en tejidos y órganos como el oviducto, el útero y
el cérvix. En el útero, la expresión de las NOSs inducible (¡NOS) y endotelial (eNOS) es
aumentada por progesterona (P). Sin embrago, se desconoce si P estimula la expresión de estas
enzimas en el oviducto.
La hipótesis de esta tesis propuso que el NO modula el aumento en la FBC inducido
por el ATP y P aumenta la expresión de las NOSs, y de esta forma, regula el efecto del ATP
sobre la FBC en el epitelio oviductal de la rata.
Para probar esta hipótesis, la FBC, [Ca 2]i y la producción de NO fueron determinadas
en cultivos primarios de epitelio oviductal de rata, en ausencia o presencia de diferentes
compuestos tales como ATP, P e inhibidores y activadores de la vía de transducción del NO.
La FBC se determinó por fotodensitometría y la [Ca 2 ]i y los niveles de NO intracelular
fueron medidos por espectrofotometría. La expresión de las NOSs se estudió por
inmunofluorescencia indirecta e inmunotransferencia.
Se determinó que los tipos de NOS neuronal (nNOS), ¡NOS y eNOS se expresaron en
cultivos primarios de epitelio oviductal. Además, se estudió el efecto del NO sobre la FBC.
Los resultados mostraron que el ATP incrementa la FBC a través de un aumento en la [Ca-"21i.
Por otra parte, se encontró que un incremento en los niveles de NO se correlacionó
temporalmente con un descenso en la FBC. Mas aún, la inhibición de las NOSs ó la PKG
potencia el efecto estimulatorio del ATP sobre la FBC y la [Ca 2 ]i. De acuerdo con estos
resultados, se encontró que una alta concentración de un análogo de GMPc reduce el efecto
estimulatorio del ATP sobre la FBC. Con respecto al efecto de P, los resultados mostraron que P estimula la expresión de las
nNOS, ¡NOS y eNOS en cultivos primarios de epitelio oviductal de rata, lo cual
presumiblemente genera un aumento en la síntesis de NO, y consecuentemente inhibe el efecto
estimulatorio del ATP sobre la FBC. Más aún, este efecto inhibitorio de P fue revertido por un
inhibidor de las NOSs.
En conclusión, estos resultados mostraron que el NO disminuye el efecto estimulatono
inducido por el ATP sobre la FBC modulando el aumento en la [Ca 2]i. Además, el
tratamiento con P indujo un aumento en los niveles de expresión de las NOSs y mostró
modular negativamente el efecto estimulatono del ATP sobre la FBC en el epitelio oviductal
de la rata.
Los resultados obtenidos en esta tesis han permitido avanzar en el conocimiento de los
mensajeros intracelulares que controlan la actividad ciliar y los mecanismos de regulación que
ejercen las hormonas ováricas sobre el transporte mucociliar en el oviducto. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Biológicas Mención Ciencias Fisiológicas 107p. PFCHA-Becas TERMINADA