Tesis Doctorado
Regulación transcripciónal de factor tisular por progresterona y vía de señalización mapk en líneas celulares de cáncer de mama
Autor
Bravo-Castillo, María Loreto
Institución
Resumen
La progesterona regula un sub-grupo de genes, los cuales estaríaninvolucrados en el desarrollo y progresión de cáncer de mama en mujeres que reciben terapia de reemplazo hormonal. Entre estos genes encontramos a Factor Tisular (TF). Se ha demostrado en diversos tipos de cáncer que la sobre-expresión de éste genera un fenotipo más invasivo, correlacionándose con un malpronóstico. Resultados publicados por nuestro laboratorio demostraron quetratamientos con progesterona en la línea celular de cáncer de mama ZR-75-1generan un aumento en los niveles de TF, tanto a nivel de proteína como demensajero. El análisis in silico muestra que el fragmento del promotor de TFcarece de elemento de respuesta a progesterona (PRE).Estudios recientes demostraron que el receptor de progesterona (PR) interactúa con vías de señalización citoplasmáticas para aumentar la transcripción de genes que carecen de PRE. Con estos antecedentes planteamos la hipótesisque: "la regulación transcripcional de TF por progesterona requiere de lafosforilación de PR y la participación de las vías de MAPK y c-Src". Los resultadosobtenidos en este trabajo mostraron que el fragmento del promotor de TF rico ensitios para unión de Sp1/Egr-1 es responsable de la activación por progesterona.Junto con esto, observamos la presencia de PR en este sitio del promotor de TF.Con respecto de la participación de MAPK, demostramos que la regulación de TF por progesterona es bifásica. En una primera etapa (hasta 12 hrs de tratamiento) no se requiere de MAPK para aumentar los niveles de mensajero, pero si es necesario a tiempos más prolongados (18 hrs). Este aumento bifásico depende de la activación de PR y no requiere de la síntesis de nuevas proteínas.Para analizar si la regulación por progesterona requiere de la fosforilación de su propio receptor utilizamos mutantes de PR en sitios clásicos de fosforilación de MAPK (S345 y S294) y un sitio rico en prolina involucrado en la interacción conotras proteínas (denominado mPRO). Observamos que la regulación de TF porprogesterona no requiere de dichos sitios en la fase independiente de MAPK, peroal analizar los niveles de mensajero a 18 hrs, fase dependiente de MAPK, serequiere del sitio mPRO de PR para aumentar tanto la proteína, como elmensajero. Está descrito que este sitio interactúa con proteínas con dominio SH3,entre las cuales encontramos a c-Src. Sin embargo, al analizar si el aumento deTF por progesterona depende de la activación de c-Src observamos que no serequiere de esta proteína para aumentar la transcripción de TF. Esto nos sugierela participación de otras vías de señalización, no descritas hasta el momento, que estarían interactuando con PR en la regulación de TF.Mostramos por primera vez un mecanismo de regulación transcripcional porprogesterona, distinto a los ya descritos. De esta manera un mayor entendimiento en la acción de PR, los factores de transcripción y las vías de transducción de señales responsables del aumento de TF puede entregar a futuro, el conocimiento necesario para el desarrollo de nuevas progestinas, las cuales podrían ser utilizadas en terapias de reemplazo hormonal sin afectar la incidencia de cáncer de mama. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Biológicas Mención Ciencias Fisiológicas 94p. PFCHA-Becas TERMINADA