Helicobacter pylori es el principal agente responsable de las patologías gastrointestinales como la gastritis crónica, úlcera, linfoma asociado a la mucosa (MALT) y adenocarcinoma gástrico. La cepa tipo 1 de Helicobacter pylori contiene un islote de patogenicidad de aproximadamente 40 kb, que contiene 27 genes. Uno de estos genes es cagA, que codifica para el antigeno A asociado a la citotoxina, uno de los genes más representativos de este elemento génico, y exclusivo de las cepas tipo 1. Los genes presentes en el islote, codifican un sistema secretor tipo IV, responsable de la translocación de la proteína CagA hacia el interior de la célula epitelial gástrica. Para estudiar este sistema traslocador y la autonomía del islote de patogenicidad en el proceso de secreción, el islote de patogenicidad de la cepa Hp J99 fue donado en un fósmido, con el cual se transformó la cepa E. cali DH5a. La integridad del clon de E. col¡ fue confirmada mediante la detección por PCR de algunos de los genes contenidos en el islote de patogenicidad. El clon que contiene este islote evidenció una deleción parcial del gen cagA. Esta deleción fue complementada por un plásmido donde se clonó el gen cagA intacto bajo la regulación de su promotor obtenido de las cepas J99 o G27, según corresponda. La expresión de los 5 genes del sistema secretor tipo IV fue detectada en lisados bacterianos. Con el objeto de demostrar el ensamble de la maquinaria secretora, la fracción de membrana externa del clon que contiene el islote de patoenicidad, fue analizado mediante electroforesis e inmuno-detección. Estos resultados mostraron la presencia en membrana externa de las proteínas CagA, VirB 10, VirB 11, VirB9 y VirB7. Esto nos demuestra que los componentes del sistema translocador son exportados a la membrana externa de E. coíi, lo que fue confirmado mediante microscopía electrónica. Con el objeto de detectar la transiocación de CagA y su efecto biológico in vitro (fenotipo "colibrí"), cultivos de células AGS se incubaron con el clon de E. coli que contiene el islote de patogenicidad y el gen cagA de la cepa Hp G27. Este experimento demostró que la proteína CagA de HpG27 es translocada hacia el interior de la célula AGS y es capaz de inducir el fenotipo colibrí. Estos resultados demuestran que la información genética que contiene el islote de patogenicidad es suficiente para ensamblar el sistema secretor tipo IV en E. coli, y transiocar la proteína CagA hacia el interior de la célula epitelial.PFCHA-BecasDoctor en Ciencias Biológicas Mención Genética Molecular y Microbiología112p.PFCHA-BecasTERMINADA