Tesis Doctorado
Regulación transcripciónal célula-específica de factor tisular por progesterona, egf y 8 br-camp en líneas celulares de cáncer de mama y endometrió
Autor
Pinto-Paganini, Mauricio Arturo
Institución
Resumen
La progesterona (P4 ) es una hormona esteroidal fundamental para la función
reproductiva. Observaciones provenientes de la clínica indican que el uso de terapias
de reemplazo hormonal (HRT) combinadas (estrógenos y progestinas) aumenta la
incidencia de cáncer de mama, mientras que disminuye la de cáncer de endometrio,
sugiriendo que P4 está regulando un sub-grupo de oncogenes en el tejido mamario,
pero no en el tejido del endometrio.
El factor tisular (TF) es una glicoproteína de membrana sobre-expresada en
diferentes tipos de cáncer. En la clínica, la presencia de esta proteína ha sido
correlacionada con metástasis, angiogénesis y trombosis. Experimentos de
"microarrays" han demostrado que el cDNA del TE es fuertemente regulado por P 4 en
células de cáncer de mama. En células epiteliales de endometrio se desconoce la
respuesta a P4 de TF.
En este proyecto postulamos que P4 regula TE de manera tejido-específica en
líneas celulares de cáncer derivadas de mama y de endometrio. Esta hipótesis se
confirmó utilizando líneas celulares caracterizadas previamente (células ZR-75-1 y
T47D de cáncer de mama e lshikawa de cáncer de endometrio). Demostramos que el
tratamiento con P4 aumenta tanto la proteína como el mRNA de TF en las células de
cáncer de mama ZR-75-1, pero no en las células de cáncer de endometrio (lshikawa).
Con el fin de investigar el sitio responsable de la regulación por P 4 , donamos el
promotor del gen del TE e identificamos un fragmento ubicado entre -110 y +8,
respecto al sitio de inicio de traducción (ATG) del gen de TE, el cual es necesario para
la respuesta a P4 . En contraste, en células lshikawa, EGF y también 8-Br-cAMP
inducen un aumento en los niveles de TE. La regulación ejercida por EGF depende de
la transcripción y ocurre rápidamente (entre 1 y 3 hrs), sugiriendo que el gen de TF se
comporta como un gen de respuesta temprana en esta línea celular.
A continuación buscamos una explicación para el efecto línea celular-específico
de P4 sobre TE en células ZR-75-1 e lshikawa. Los resultados no demostraron
diferencias (polimorfismos o alteraciones) a nivel de secuencia del promotor, ni diferencias en el patrón de metilación, determinado a través del análisis de
secuenciación por bisulfito de un fragmento del promotor, pero sí encontramos
diferencias en los sitios de inicio de transcripción de TF entre ambas líneas celulares.
Usando la técnica de 5'RACE, encontramos que tanto las células ZR-75-1 como
Ishikawa poseen al menos dos sitios de inicio de transcripción adicionales al sitio
informado en la literatura y que la posición relativa de estos sitios difiere entre ambas
líneas celulares. En ZR-75-1 existe un sitio "río arriba" y otro "río abajo" respecto al
sitio conocido. En contraste, en células lshikawa ambos sitios se encuentran "río
arriba" respecto al sitio conocido. Esto sugiere que la regulación diferencial entre la
mama y el endometrio puede ser resultado de un uso diferencial del promotor de TF.
En suma, P4 regula TF en células de cáncer de mama. En contraste, EGF y 8-
Br-cAMP regulan TF en células de cáncer de endometrio. Estos hallazgos, sumados al
estudio de las vías de transducción utilizadas para el aumento de la transcripción del
gen de TF permitirá el desarrollo de futuras terapias específicas contra el desarrollo y
progresión del cáncer de mama y de endometrio. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Biológicas Mención Ciencias Fisiológicas 118p. PFCHA-Becas TERMINADA