Tesis de maestría
Desarrollo de una técnica simple para determinar la capacidad de fertilización de espermatozoides de caprinos, basada en la penetración de oocitos de bovinos.
Autor
Ledezma Torres, Rogelio Alejandro
Resumen
"El objetivo del presente estudio fue desarrollar una técnica simple para evaluar la capacidad de fertilización de los espermatozoides de machos cabríos, utilizando oocitos de bovino tratados con NaOH y diferentes técnicas para la capacitación de los espermatozoides.
El trabajo se dividió en tres fases. En la fase 1, se evaluaron diferentes concentraciones (0.5, 1.0 y 1.5 N) y tiempos (2.0, 2.15, 2.5 y 3.0 minutos) de exposición a NaOH para eliminar las células de la granulosa de oocitos de bovino. En la fase 2, se evaluaron las siguientes técnicas de capacitación de los espermatozoides: incubación en oviductos de bovinos, en células de la pared interior de oviductos de bovino, en suero sanguíneo de cabra en estro y en heparina. En la fase 3, se evaluó la fertilización in vitro.
En la fase 1 se obtuvo el 100 por ciento de denudación (eliminación de las células de la granulosa y eliminación parcial de la zona pelúcida) de oocitos de bovinos, cuando se utilizó una concentración 1 N de NaOH y un tiempo de exposición de 2.15 minutos.
En la fase 2, la capacitación de los espermatozoides incubados en oviductos de bovino, no sobrepasó el 20 por ciento. En este experimento el tiempo de incubación no afectó el porcentaje de células capacitadas (P > 0.05), pero se observó un mayor (x2 = 32.7, 1 gl, P < 0.01) número de células capacitadas con el semen "sin lavar" comparado con el semen "lavado" (sin líquido seminal). No existió interacción entre el estatus del semen y el tiempo de incubación de las células espermáticas. En otro experimento, la capacitación de los
espermatozoides incubados con células de la pared interior
de oviductos de bovino, alcanzó el 50 por ciento. El estatus del semen no influyó sobre la capacitación de los espermatozoides, pero el tiempo de incubación afectó significativamente (x2 = 4.97, 3 gl, P < 0.05) el número de células espermáticas capacitadas. No existió interacción entre el estatus del semen y el tiempo de incubación. En otro experimento, la proporción de células espermáticas capacitadas con suero sanguíneo de cabra en estro y
heparina fueron, 57.5 y 61.0 por ciento cuando se
incubaron por 1 hora y, 83.0 y 88.0 por ciento cuando se incubaron por 40 minutos (x2 = 68.9, 1 gl, P < 0.01) respectivamente. El estatus del semen no influyó (P > 0.05) en los resultados encontrados y no existió interacción entre los tratamientos y estatus del semen en la capacitación de espermatozoides de caprinos.
En la fase 3 del estudio se llevó a cabo la fertilización in vitro, utilizando una incubadora para huevos de ave. Se obtuvo un 66.6 por ciento (10/15) de penetración de los oocitos tratados con NaOH y expuestos a espermatozoides capacitados con heparina. En el 33.4 por ciento restante de los oocitos no se logró observar cabezas descondensadas de espermatozoides, pero se observó gran cantidad de espermatozoides en la periferia de los oocitos." "The objective of this study was to develop a simple technique to evaluate the fertilizing capacity of buck spermatozoa, utilizing bovine oocytes treated with NaOH and buck semen subjected to different treatments to induce capacitation.
The study was divided into three phases. In phase 1, different concentrations (0.5, 1.0 y 1.5 N) of NaOH and exposition times (2.0, 2.15, 2.5 y 3.0) to eliminate the granulosa cells of the bovine oocytes were evaluated. During phase 2, capacitation of spermatozoa was induced by incubating the semen in bovine oviducts; in cells of the interior wall of bovine oviducts; in blood serum of does in estrus and in heparin. During phase 3, an in vitro fertilization trial in a mannual hen's egg incubator was carried out.
In phase 1, 100 percent of denudation (elimination of granulosa cells and partial elimination of zona pellucida) of bovine oocytes was obtained, when oocytes were exposed to NaOH 1 N during 2.15 minutes.
In phase 2, capacitation of spermatozoa incubated in bovine oviducts, did not surpassed 20 percent. In this experiment the incubation time did not affect the percentage of capacitated sperm cells (P > 0.05), but higher (x2 = 32.7, 1 DF, P < 0.01) numbers of capacitated spermatozoa were observed with intact semen compared to "washed" semen (without seminal liquid). Interaction was not detected between the status of semen and the incubation time of the spermatozoa. In another experiment, capacitation of spermatozoa incubated with cells of the interior wall of bovine oviducts reached 50 percent. The
status of semen did not to influence the percentage of
capacitated spermatozoa, but the incubation time significantly affected (x2 = 4.97, 3 DF, P < 0.05) the percentage of capacitated sperma cells. Interaction was not detected between status of the semen and the incubation time. In a third experiment, the percentage of capacitated sperma cells incubated either with blood serum of does in estrus and heparin were, 57.5 and 61.0 percent when incubate for 1 hour and, 83.0 and 88.0 percent when incubate for 40 minutes (x2= 68.9, 1 DF, P < 0.01) respectively. The status of semen (washed or not washed) did not influence (P > 0.05) capacitation and it did not exist interaction between treatments and status of semen.
In phase 3 of the study on the in vitro fertilization trial was carried out, utilizing a mannual incubator for hens's eggs. Sixty seven percent (10/15) of the oocytes treated with NaOH 1 N were penetrated by buck spermatozoa trated with heparin. It is concluded that the technique deicribed in this study can be used to evaluate the fertilizing capacity of buck spermatozoa."