TESIS
Aislamiento e identificación de actinobacterias del género salinispora
Fecha
2019-05-07Registro en:
Vargas Corona, Carlos. (2016). Aislamiento e identificación de actinobacterias del género salinispora. (Ingeniero Bioquímico). Instituto Politécnico Nacional, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
Vargas Corona, Carlos
Institución
Resumen
RESUMEN: Las actinobacterias de origen marino han sido el objeto de varios estudios en las últimas dos décadas. La capacidad e importancia del género Salinispora y sus tres especies bacterianas: 1) Salinispora arenicola, 2) Salinispora pacifica y 3) Salinispora tropica son los compuestos como potentes anticancerígenos que ellas producen. Existe evidencia que Salinispora arenicola es una buena y rica fuente de compuestos bioactivos, pero se tiene el inconveniente de que las secuencias del gen 16S rRNA están muy bien conservadas entre las tres especies de este género. Este género parece estar adaptado a la vida en los océanos y no crece cuando la aguamarina es remplazada por agua destilada en el medio de cultivo. En el presente proyecto, una colección de 75 actinobacterias aisladas de un sedimento marino subtropical recolectado en Punta Arena de la Ventana, Baja California Sur, México (Mar de Cortés) fue estudiado y caracterizado por varias pruebas que incluyen propiedades fenotípicas y genotípicas. 66 aislados presentaron las características morfológicas típicas de miembros de la familia Micromonosporaceae y los géneros Micromonospora, Verrucosispora y Salinispora. Mediante una prueba de crecimiento tanto en medio sólido preparado con agua marina artificial, como con agua destilada, se encontró que 71 de los aisladosson bacterias
halofílicas moderadas estrictas. Se realizó un rep-PCR (ERIC y BOX) para comparar la huella genómica de cada microorganismo aislado. Mediante el uso de iniciadores específicos para la clase Actinobacteria, la familia Micromonosporaceae y el género Salinispora, se observó que de los 75 aislados, el 90 % (68 aislados) presentaron una reacción de PCR positiva para la clase Actinobacteria, lo que confirma la pertenencia de los aislados a esta clase, el 89 % (67 aislados) presentaron un producto de PCR específico para la familia Micromonosporaceae y el 81 % (61 aislados) para el género Salinispora. El secuenciamiento del gen 16S rRNA se realizó a 40 de las Salinispora putativas. El correspondiente análisis filogenético mostraron su pertenencia al género Salinispora y su relación con Salinispora arenicola.
ABSTRACT: In the last two decades actinobacteria from marine origin has been the object of several studies. The capacity and importance of the genus Salinispora and its bacterial species: 1) Salinispora arenicola, 2) Salinispora pacifica and 3) Salinispora tropica is the potent anticarcer compounds they produce. There is evidence that Salinispora arenicola are a good and rich source of bioactive compounds but a major drawback is the highly conserved 16S rRNA gene sequence between all the strains. This genus seems to have adapted to life in the oceans and do not grow when seawater is replaced with deionized water in the growth medium. In the present project, a collection of 75 actinobacteria isolates from subtropical sediment collected in Baja California Sur, Mexico, was
studied and characterized by a polyphasic approach which included both genotypic and phenotypic properties. 66 strains showed typical characteristics of members of the family Micromonosporaceae and the genera Micromonospora, Verrucosispora and Salinispora. Using solid media prepared with salt and without, 71 isolates were selected as moderate halophilic actinobacteria. Molecular fingerprint as ERIC- and BOX- rep-PCR were used to dereplicate the isolates. Using PCR and specific primers, the isolates were identified as members of the class Actinobacteria, the family Micromonosporaceae and of the genus Salinispora. 90 % of the isolates (68) belong to the class Actinobacteria, 89 % (67) belong to the family Micromonosporaceae and 81 % (61) belong to the genus Salinispora. Forty isolates were used to sequence the 16S rRNA gene. The corresponding phylogenetic tree showed that they belong to Salinispora arenicola.