Producción de extractos de Dracocephalum moldavica L. y Agastache mexicana ssp. mexicana y evaluación de la actividad antidepresiva

Abstract

Resumen La depresión es una enfermedad mental que afecta a 340 millones de personas en todo el mundo, siendo más frecuente en las mujeres que en los hombres; generalmente el episodio de depresión puede aparecer entre los 25 y 35 años de edad. En México se estima que el 8.4% de la población ha sufrido un episodio de depresión alrededor de los 24 años. Para este tipo de enfermedades así como otras relacionadas con el Sistema Nervioso Central (SNC) no solamente existen tratamientos alopáticos, sino también derivados de plantas medicinales, como es el caso de las Lamiaceaes Dracocephalum moldavica L. y Agastache mexicana ssp. mexicana conocidas comúnmente como toronjil azul y toronjil morado respectivamente, estas plantas han sido usadas en algunas enfermedades relacionadas con el Sistema Nervioso Central (SNC). Principalmente son usadas sus partes aéreas que comprenden (hoja, tallo y flor) para preparar tés, infusiones o macerados para beber. En el presente trabajo se enfocó en estudiar la actividad antidepresiva de los extractos de Dracocephalum moldavica L. y Agastache mexicana ssp. mexicana. Se evaluaron cualitativamente los metabolitos secundarios presentes en los extractos y se cuantificaron; flavonoides, fenoles, alcaloides, esteroides, taninos y la actividad antioxidante por el método DPPH y ABTS. Dentro de los ensayos de la actividad antioxidante el extracto de toronjil morado presentó 99.39 % de inhibición, mientras que el toronjil azul presentó 98% de inhibición por el método ABTS, con el método DPPH mostraron 87.67 y 88.68 % de inhibición respectivamente, resultando que ambos extractos tienen alta capacidad antioxidante. En la prueba de toxicidad (DL50) fue de 5 g/Kg de ratón, mostrando que no hay efectos toxicológicos, únicamente diarrea como efecto secundario en la concentración de 250 mg/Kg del toronjil morado y sueño en la dosis de 750 mg/Kg del toronjil azul. Por otro la prueba de citotoxicidad (IC50) realizadas en la línea celular C6 glial, obteniendo una IC50 para el extracto de Agastache mexicana ssp. mexicana de 1985 μM/mL, mientras que para el extracto de Dracocephalum moldavica L. fue de 5173 μM/mL. La investigación de la actividad antidepresiva de los extractos fue en modelos in vivo usando la Prueba de Nado Forzado (PNF) (modelo de desesperanza) y Separación Materna Temprana (SMT). Las dosis probadas de los extractos fueron de 80 y 100 mg/Kg de ratón. En la PNF las dosis probadas mostraron reducir el tiempo de inmovilidad; 58.8±5.06 y 72.6±7.33 [s/5 min] para la dosis de 80 mg/Kg de ratón del toronjil azul y morado respectivamente, 48.8±14.61 y 72.8±10.28 [s/5 min] para la dosis de 100 mg/Kg de ratón del toronjil azul y morado respectivamente, 178.8±31.35 [s/5 min] para el grupo control, la administración de todos los grupos fue por vía oral. Mientras que en la SMT las dosis probadas redujeron el tiempo de inmovilidad en los grupos destetados para la dosis de 80 mg/Kg ratón; 65±12.24 y 56.2±7.01 [s/5 min] para el toronjil azul y morado respectivamente, 257.8±6.01 [s/5 min] para el grupo control, mientras que en la dosis de 100 mg/Kg ratón fueron 56.4±6.84 y 61.4±4.27 [s/5 min] para el toronjil azul y morado respectivamente. Por otro lado el grupo de los no destetados en la dosis de 80 mg/Kg de ratón 28.2±3.63 y 28.6±7.79 [s/5 min] para el toronjil azul y morado respectivamente, 216.2±9.65 [s/5 min] para el grupo control, mientras que en la dosis de 100 mg/Kg 23.8±12.07 y 31.4±4.27 [s/5 min] para el toronjil azul y morado respectivamente. Los extractos fueron purificados por dos métodos; cromatografía en columna abierta y cromatografía preparativa, donde se obtuvieron 24 fracciones para el toronjil azul y 34 para el toronjil morado por cromatografía en columna abierta, mientras que por cromatografía preparativa se obtuvieron 68 fracciones para el toronjil azul y 90 para el toronjil morado; además de haber incrementado el rendimiento de las subfracciones por cromatografía preparativa. Finalmente se obtuvieron los espectros IR y los espectros de masas de las subfracciones. De los espectros IR obtenidos se pudieron identificar grupos funcionales como C=O, CH2, -C=O, CH3, O-H, C=C y C-C. Mientras que los resultados obtenidos de la espectroscopia de masas arrojaron tener un acercamiento a moléculas como crisina, robinetinidina, boldina y acido linolenico.

Abstract. Depression is a mental illness that affects 340 million people worldwide, being more common in women than in men; generally episode of depression may appear between 25 and 35 years old. In Mexico it is estimated that 8.4% of the population has had an episode of depression about 24 years. For these diseases and others related to the Central Nervous System (CNS) do not exist only allopathic treatments but also derived from medicinal plants, such as the Lamiaceaes Dracocephalum moldavica L. and Agastache mexicana ssp. mexicana commonly known as ―toronjil azul‖ and ―toronjil morado‖ respectively, these plants have been used in some related to the Central Nervous System (CNS) diseases. Mainly they are used aerial parts that comprising (leaf, stem and flower) to prepare teas, infusions or macerated to drink. In the present work it focused on studying the antidepressant activity of extracts of Dracocephalum moldavica L. and Agastache mexicana ssp. mexicana they were evaluated qualitatively secondary metabolites present in the extracts and they were quantified flavonoids, phenols, alkaloids, steroids, tannins and antioxidant activity by DPPH and ABTS method. Within assays of the antioxidant activity of the extract of ―toronjil morado‖ it presented 99.39% inhibition, while ―toronjil azul‖ it presented 98% inhibition by the ABTS method, with the DPPH method showed 87.67 and 88.68% inhibition respectively, resulting in both extracts have high antioxidant capacity. In the toxicity test (LD50) was 5 g/Kg of mouse, showing no toxicological effects, only diarrhea as a side effect in the concentration of 250 mg/Kg of ―toronjil morado‖ and sleep in the dose of 750 mg/Kg ―toronjil azul‖. On the other the cytotoxicity test (IC50) made in glial cell line C6, obtaining an IC50 for extract of Agastache mexicana ssp. mexicana was 1985 mM/mL, whereas for extract of Dracocephalum moldavica L. was 5173 mM/mL. The investigation of the antidepressant activity of the extracts was in vivo models using the Forced Swimming Test (FST) (model hopelessness) and Maternal Separation Early (MSE). The doses tested of the extracts were 80 and 100 mg/Kg of mouse. In the FST the doses tested they showed reduce the immobility time; 58.8±5.06 and 72.6±7.33 [s/5 min] for the dose of 80 mg/Kg mouse ―toronjil azul‖ and ―toronjil morado‖ respectively, 48.8±14.61 and 10.28±72.8 [s/5 min] for the dose of 100 mg/Kg mouse ―toronjil azul‖ and ―toronjil morado‖ respectively 178.8±31.35 [s/5 min] for the control group, the administration of all groups was orally. While in the MSE the doses tested they reduced the immobility time in the groups weaned for dose of 80 mg/Kg mouse; 65±12.24 and 56.2±7.01 [s/5 min] for the ―toronjil azul‖ and ―toronjil morado‖ respectively 257.8±6.01 [s/5 min] for the control group, while the dose of 100 mg/Kg mouse were 56.4±6.84 and 61.4±4.27 [s/5 min] for the ―toronjil azul‖ and ―toronjil morado‖ respectively. On the other hand the group of unweaned in the dose of 80 mg/Kg of mouse 28.2±3.63 and 28.6±7.79 [s/5 min] for the ―toronjil azul‖ and ―toronil morado‖ respectively 216.2±9.65 [s/5 min] to the control group, while the dose of 100 mg/Kg 12.07± 23.8 and 31.4±4.27 [s/5 min] for the ―toronjil azul‖ and ―toronjil morado‖ respectively. The extracts were purified by two methods; open column chromatography and preparative chromatography, where were obtained 24 fractions for ―toronjil azul‖ and 34 fractions for ―toronjil morado‖ by open column chromatography while by preparative chromatography were obtained 68 fractions for ―toronjil azul‖ and 90 fractions for ―toronjil morado‖.; besides having increased yields of the subfractions by preparative chromatography. Finally IR and mass spectra were obtained of the subfractions. IR spectra obtained could be identified functional groups such as C=O, CH2, C=O, CH3, OH, C=C and C-C. While the results of mass spectroscopy threw have an approach to molecules as chrysin, robinetinidina, boldina and linolenic acid.