Tesis
La fagoterapia como estrategía para reducir la mortalidad por vibriosis en larvas de camarón blanco Litopenaeus vannamei
Fecha
2016-10-10Autor
Lomelí Ortega, Carlos Omar
Institución
Resumen
En este trabajo la virulencia de varias cepas de Vibrio fue evaluada sobre larvas de
camarón y se analizó la capacidad de la terapia con fagos para controlar la vibriosis.
Se implementó un modelo para inducir experimentalmente la vibriosis, el cual fue
usado durante los ensayos de fagoterapia. Las infecciones experimentales se
realizaron en recipientes con 100 mL de agua de mar artificial estéril a una densidad
de un nauplio por mL. Las larvas fueron mantenidas en durante 96 h con un alimento
a base de microalgas (Chaetoceros calcitrans o Thalasiossira weisflogii) a dosis
diarias de 1•105
cel•mL-1. Para evitar la interferencia causada por las bacterias
asociadas a los nauplios o microalgas, las larvas fueron desinfectadas con dióxido
de cloro (ClO2) a 0.3 ppm durante 180 segundos y las microalgas tratadas con
antibióticos para reducir su carga bacteriana. Con V. parahaemolyticus cepa ATCC
17802 se indujeron experimentalmente los signos de vibriosis y las mortalidades
registradas fueron mayores al 40 % a una dosis de 2•106
UFC•mL-1; los signos de
vibriosis incluyeron excitación de cromatóforos, anorexia, deformación de apéndices
y puntos negros sobre el cuerpo. Los fagos Vpms1 y A3S fueron efectivos para
reducir la mortalidad y los signos de vibriosis en las larvas. Una sola dosis de 1•106
UFP•mL-1 (a un índice de multiplicidad de infección MOI= 0.4) para ambos fagos fue
suficiente para eliminar los efectos negativos de V. parahaemolyticus. La aplicación
del fago vpms1 dentro de un lapso de tiempo no mayor de 12 h post-infección generó
los mejores valores de supervivencia (71 % ± 3.81) los cuales no fueron
significativamente diferentes del control sin infectar (P>0.05), y retrasando la
aplicación de fagos por más tiempo (de 24 a 36 h) se detiene la mortalidad, lo que es
una evidencia del potencial correctivo del uso de fagos. En consecuencia, el uso de
la fagoterapia en el tratamiento de la vibriosis de camarón blanco puede considerarse
efectivo para prevenir y controlar la vibriosis. ABSTRACT
In this study the virulence of several Vibrio strains was evaluated on shrimp larvae
and examined the ability of phage therapy to control vibriosis. A model to
experimentally induce the vibriosis was implemented, which was used during phage
therapy testing. Experimental infections were performed in containers with 100 mL of
sterile artificial seawater at a density of 1 nauplii per mL. The larvae were kept during
96 h with an algae-based food (Chaetoceros calcitrans or Thalasiossira weisflogii) at
daily doses of 1• 105
cel • mL-1. To avoid interference of bacteria associated to nauplii
or algae, larvae were disinfected with chlorine dioxide (ClO2) at 0.3 ppm for 180
seconds and microalgae treated with antibiotics to reduce bacterial load. The
experimental vibriosis was induced with V. parahaemolyticus strain ATCC 17802,
including signs and mortalities greater than 40% at a dose of 2 • 106
CFU • mL-1, the
signs of vibriosis include excitation of chromatophores, anorexia, deformed
appendages and black spots on the body . The phages Vpms1 and A3S were
effective to reduce mortality and signs of vibriosis in larvae. A single dose of 1 • 106
PFU • mL-1 (at an index of multiplicity of infection MOI = 0.4) for both phages was
enough to eliminate the negative effects of V. parahaemolyticus. The application of
phage vpms1 within a period not longer than 12 h post-infection produced the best
survival values (71% ± 3.81) which were not significantly different from uninfected
control (P> 0.05), and delaying the application of phages for longer (24 to 36 h) the
mortality was stopped, which is evidence of the corrective potential of using phages.
Consequently, the use of phage therapy can be considered effective to preventing
and controlling vibriosis in whiteleg shrimp.