Tesis
Participación de la inmunidad innata en la patogenia del dengue
Fecha
07/12/2010Registro en:
Domínguez Martínez, Diana Alhelí. (2009). Participación de la inmunidad innata en la patogenia del dengue. (Maestría en Ciencias en Inmunología). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
Domínguez Martínez, Diana Alhelí
Institución
Resumen
ABSTRACT: The molecular mechanisms involved in the pathogenesis of a primary or secondary infection by dengue virus (DENV) have not been fully established and in some cases are controversial. It has been suggested an innate antiviral response against DENV elicited by RNA species recognition through Toll-like receptors (TLR) and the identity/quantity of cytokines produced during the early infection stages could be important either in DENV control, symptomatology or in the pathogenesis of disease. It was reported that TLR-3 and TLR-7 are upregulated in cell lines THP-1, U-937 (monocytes-macrophages), HEK-293 cells transfected with TLR-3 as well as plasmacytoid-dendritic cells infected with DENV. However, there are not reports about TLR response after DENV infection in human monocytes, central target cells in the natural infection. The aim of this work was assess TLR-3, -7 and -8 cellular expression as well as proinflammatory cytokines IL-6, IFN-α and TNF-α in response to DENV-2 in monocytes of Mexicans volunteers and THP-1 cells. The immunogenetic profile (HLA-I and HLA–II) of the population was taken into account looking for a correlation between HLA markers and TLR response. Two cellular study models were established: DENV-2 infection and transfection with specific TLR agonists. The TLR expression was evaluated by flow cytometry and RT-PCR at 24 hours post-stimulation on CD14+ cells infected (MOI:10). Results showed an upregulation of TLR-3, -7 and -8. Increase of IL-8, IL-6, IFN-α and TNF-α was demonstrated. The rise in the expression of TLR-8 is a new finding in response against DENV2. RESUMEN: Los mecanismos moleculares involucrados en la patogénesis de una infección primaria o secundaria por los virus dengue (DENV) no se han establecido completamente y en algunos casos son controvertidos. La respuesta innata antiviral contra el DENV sería producida por el reconocimiento de sus RNA por receptores tipo Toll (TLR) y la identidad/cantidad de las citocinas producidas durante los primeros eventos de la infección son importantes en el control del DENV, en la sintomatología de la infección y en la patogénesis de la enfermedad. Se ha reportado que después de la infección con el virus del dengue, los TLR-3 y TLR-7 se estimulan en las líneas celulares THP-1, U-937 (monocitos/macrófagos), las células HEK-293 transfectadas con TLR-3 y en células dendríticas plasmacitoides. Sin embargo, no hay informes acerca de la respuesta de TLR durante una infección en monocitos humanos, células blanco en una infección natural. El objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión de TLR-3, TLR-7 y TLR-8 así como la producción de las citocinas pro-inflamatorias IL-6, IFN-? y TNF-? en respuesta al DENV-2 en monocitos de voluntarios mexicanos y en células THP-1. Con respecto a la población estudiada se tomó en cuenta el perfil inmunogenético (HLA-I y HLA-II) para establecer la posible correlación de estos marcadores con la respuesta de TLR. Se establecieron dos modelos celulares de estudio: infectadas con DENV-2 y transfectadas con agonistas específicos de TLR. La expresión de los TLR fue evaluada por citometría de flujo y RT-PCR a 24 horas post-estímulo en células CD14+ (MOI:10). Los resultados muestran un aumento en la expresión de TLR-3, -7 y - 8. Las citocinas IL-8, IL-6, IFN-? y TNF-? se encontraron aumentadas. La expresión incrementada de TLR-8 es un nuevo hallazgo en la respuesta contra DENV-2.