Tesis
Evaluación del efecto del extracto dializable de leucocitos (DLE), en la encefalomielitis autoinmune experimental
Fecha
02/03/2010Registro en:
De la Fuente Granada, Marisol. (2009). Evaluación del efecto del extracto dializable de leucocitos (DLE), en la encefalomielitis autoinmune experimental. (Maestría en Ciencias en Inmunología). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
De la Fuente Granada, Marisol
Institución
Resumen
ABSTRACT: Dialyzable leukocyte extracts (DLE) are composed by a large number of
molecules with biological activity. These extracts are obtained from the lysis of
leukocytes which are dialysed through a 12 KDa cutoff membrane. DLE can
transfer cellular immune responses. Since the 60´s and until now, DLEs have been
used as therapy for different diseases such as: infectious diseases (viral, bacterial,
fungal and parasitic); severe immunodeficiencies; hypersensitivity; autoimmune
diseases, as well as adjuvant therapy for cancer. DLE have been used for the
treatment of multiple sclerosis (MS), an autoimmune disease, with good results,
without knowledge until now, on how the autoimmune response could be modified
by the treatment. Therefore in this work, an experimental model of MS in mice
(experimental autoimmune encephalomielitis (EAE)) was established in order to
study those changes related to the DLE treatment. This model has provided
information about the role that different cells and cytokines play in the
pathogenesis of EAE, making it highly attractive for our purposes.
The main aim of this project was to evaluate the effect of murine DLE (mDLE)
as treatment for EAE, through the measurement of changes in symptoms, weight,
cytokine levels and percentage of regulatory T cells (Treg) and interleukin 17
secreting T cells (Th17).
The establishment of the EAE model was carried out inoculating mice with 300
μg of MOG35-55 in Complete Freund´s Adjuvant, using 500 mg/ml of heat killed
Mycobacterium tuberculosis H37Rv, together with two injections of 200 ng each, of
Pertussis Toxin (PT) on days 0 and 2. The treatment of EAE mice with mDLE did
not modify the clinical status of the ailment. However, changes in cytokine levels
and T cell numbers were observed. On day 23 EAE mice treated with 0.001 μg, 0.1
μg and 1 μg of mDLE, TNF-alpha levels were increased with respect to control
mice. While IFN gamma, TGF-beta and Treg cells decreased. These changes
were statiscally significant, meaning that although no clinical improvement was
observed in these animals, mEDL could exert a regulatory effect on the immune
response of EAE mice. RESUMEN: Los extractos dializables de leucocitos (DLE, dializable leukocyte extracts); están compuestos por una gran variedad de moléculas con actividad biológica. Estos extractos son capaces de transferir la respuesta inmune celular, y se obtienen de la lisis de
leucocitos y su posterior diálisis empleando membranas con un corte molecular de 12kDa. Desde la década de los sesenta, los DLE han sido empleados como terapia en distintas enfermedades tales como: infecciones por virus, hongos, parásitos y bacterias, inmunodeficiencias severas, hipersensibilidad, autoinmunidades, y como terapia complementaria en neoplasias. Los extractos dializables de leucocitos (DLE) han sido empleados en el tratamiento de la esclerosis múltiple (EM) con buenos resultados clínicos sin conocer los cambios inmunológicos que éste produce en el individuo, siendo necesario establecer un modelo experimental que permita estudiar dichos cambios. El modelo de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) ha sido ampliamente estudiado y ha permitido conocer la importancia tanto de citocinas como de células involucradas en esta enfermedad; por lo cual este modelo resulta el idóneo para evaluar cambios puntuales al emplear el DLE como tratamiento. El objetivo de este proyecto fue evaluar el efecto el tratamiento con DLEm en el
modelo murino de encefalomielitis autoinmune experimental. Se efectuó la reproducción del modelo de EAE y posteriormente se evaluaron diferentes dosis de extracto dializable de leucocitos murino (DLEm), evaluando los cambios en sintomatología, peso, niveles de
citocinas y porcentajes de células Treg y Th17. La reproducción del modelo de EAE se llevo a cabo inoculando a los ratones 300?g
de MOG35-55 en CFA con una concentración de 500?g/100?l de M. tuberculosis H37Rv; en conjunto con 2 inyecciones de TP de 200ng los días 0 y 2. El tratamiento de los ratones con EAE con DLEm no modifica el estado clínico de la enfermedad, sin embargo se observaron cambios en los niveles de citocinas y células. El día 23 los ratones con EAE tratados con 0.001, 0.1 y 1?g de DLEm, incrementaron los
niveles de TNF-? con respecto al control; mientras que IFN-?, TGF-? y Treg disminuyeron. Estos cambios fueron estadisticamente significativos, por lo tanto aunque no se observo ningún cambio en la mejora clínica de los animales, el DLEm puede ejercer un efecto
regulador sobre la respuesta inmune en la EAE.