Tesis
Evaluación de características fenotípicas y genotípicas de cepas de streptococcus pyogenes
Fecha
25/02/2010Registro en:
Jiménez Rojas, Leticia Verónica. (2009). Evaluación de características fenotípicas y genotípicas de cepas de streptococcus pyogenes.(Doctorado en Ciencias en Biomedicina y Biotecnología Molecular). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
Jiménez Rojas, Leticia Verónica
Institución
Resumen
ABSTRACT: Group A Streptococcus is a pathogen that although usually colonizes throat and skin, is
responsible for many infections. Since the middle of the 80s, there were reports of increasing
mortality rates for these infections, involving different virulence and pathogenic factors. The M
protein (emm) is the major virulence factor and some emm-types have been associated with some
illnesses. Although probably the host factors influence, not to know which specific factors could
be the virulence characteristics that provide to GAS, there is capacity to amplify its potential and
induce a simple faringotonsillitis or a serious sepsis that could lead to death. The aim of the this
study was determined the phenotypic and genotypic characteristics of clinical isolated of GAS
and assess the possible correlation among these characteristics associated to the virulence and the
skill for invade cellular line A549. The GAS strains were evaluated by standard bacteriologic
methods. One representative colony from each isolated was selected to characterization and
diversity genetic search by PFGE. Results were analyzed, and some strains isolates from different
sources was chosen for adhesion and invasion assays to tissue cultures. Seventy six strains of
GAS were recovered from several origins, half (38) corresponding from pharynx. T1 was the
serotype most frequent of T antigen (33/76). The results showed that the predominant antigenic
M protein (emm type) was emm 1 (34/76), following for emm 2 and emm 22 (9/76 each of them)),
for both groups of the isolates, invader and pharynx origin. Was demonstrated that the gene that
codify to SPE B is present with more frequency (71%). The susceptibility tests showed 100% of
sensibility to penicillin and clindamycin and were found seven strains erythromycin-resistant
(9.2%) all of them expressed M phenotype and had the mef A gene. The percentage of adherence
and invasion to A549 cells was higher in invader origin strains than pharynx strains. The PFGE
analysis developed a wide genetic diversity, since as we obtained 24 different electrophoretic
patterns, 13 of them in invasor origin strains, while 15 from pharynx. In conclusion, not is
possible to establish a relationship among the principal types of GAS virulence factors and the
disease entities associated to pharynx or invasor. RESUMEN: El estreptococo del grupo A (GAS) es un patógeno que coloniza comúnmente la garganta y la piel, aunque es responsable de una gran diversidad de infecciones. Desde mediados de la década de 1980, se ha descrito un incremento en las tasas de mortalidad por estas infecciones, involucrándose los diferentes factores de virulencia que posee. La proteína M representa el principal antígeno de virulencia y los serotipos reconocidos se han asociado con cuadros clínicos específicos. Aunque es probable que influyan factores del hospedero, se desconoce cual o cuales son, específicamente; las características de virulencia que proveen la capacidad a GAS de amplificar su potencial y provocar, ya sea una leve faringoamigdalitis o un cuadro grave de sepsis, la cual puede conducir hasta la muerte. El propósito de este estudio fue determinar las características fenotípicas y genotípicas de aislados clínicos de GAS y evaluar la posible
correlación entre estas características asociadas a la virulencia y su capacidad para invadir cultivos celulares (línea A549). Para ello, se evaluaron cepas de GAS mediante técnicas bacteriológicas convencionales. Una colonia representativa de cada uno de los aislamientos se seleccionó para la caracterización y la búsqueda de diversidad genética mediante PFGE. Se analizaron los resultados, se eligieron algunas cepas obtenidas de diferentes procesos infecciosos y se utilizaron para ensayos de adhesión e invasión a cultivos celulares. Se recuperaron 76 cepas de GAS, provenientes de diversos orígenes, correspondiendo 38 a faringe. El serotipo más frecuente del antígeno T, fue T1 (33/76). Los resultados obtenidos mostraron predominancia de la proteína antigénica M tipo emm 1, seguido de emm 22 tanto para los aislamientos de origen invasor como para los faríngeos. Se demostró que el gen que codifica para la exotoxina pirogénica estreptocócica del tipo B fue el que se presentó con mayor frecuencia (71%). Las pruebas de susceptibilidad, mostraron 100% de sensibilidad a la penicilina y a la clindamicina y se encontraron 7 cepas (9.2%) resistentes a la eritromicina, todas ellas evidenciaron ser fenotipo M y poseer el gen mef A. El porcentaje de adherencia a las células A549 fue mayor en las cepas de origen invasor comparado con las de faringe. El análisis por PFGE reveló una amplia diversidad genética, ya que se obtuvieron 24 patrones electroforéticos diferentes, 13 de ellos presentes en las cepas de origen invasor, mientras que 15 en las de faringe. Se concluye, que no fue posible establecer una relación entre los tipos de los principales factores de virulencia de los GAS y el cuadro clínico asociado, ya sea local o invasor.