Nuestra Empresa se Dedica de Manera Muy Innovadora a la Producción de Azafrán In Vitro y en Campo. Para Poder Asegurar una Correcta Propagación In Vitro es Necesario Asegurar que los Cultivos se Encuentren Libres de Patógenos para Esto:el Objetivo de este Proyecto es Identificar y Detectar mediante Técnicas Moleculares los Patógenos que Afectan al Cultivo de AzafránPara Poder Establecer los Cultivos In Vitro es Necesario que los Cultivos Utilizados se Encuentren en las Mejores Condiciones para Poder Propagarlos para esto es Esencial Identificar que Patógenos Presentan Estos Cultivos y Seleccionar Solo los Bulbos que se Encuentren Libres de Patógenos para su Propagación y Cultivo en Campo. La Identificación Temprana de los Bulbos Libres de Patógenos Nos Permitirá Generar Cultivos de Alta Calidad y una Producción Adecuada para Satisfacer las Necesidades del Mercado. El Servicio que se Solicita en Esta Propuesta es la Identificación de Patógenos que Afectan al Cultivo de Azafrán mediante Técnicas de Biología Molecular (pcr). Para esto Realizaremos el Siguiente Plan de Actividades:1. Toma de Muestras de Bulbos. Se Analizará una Muestra Representativa de la Población de Bulbos que se Desea Introducir en el Sistema de Propagación In Vitro (50 Bulbos)2. Estandarización de un Protocolo de Extracción de Dnadebido a que en Chile No se ha Realizado este Protocolo con Anterioridad es Necesario Estandarizar la Extracción de Dna de los Bulbos. Esta Extracción Permitirá Extraer Dna Tanto del Bulbo como de los Patógenos Contaminantes que Estén Presentes en las Muestras y Posibilitar su Detección mediante Pcr. 3. Detección por Pcr y Secuenciación:de Acuerdo a lo Descrito en la Literatura Identificamos 4 Bacterias Endófitas (bacillus Aryabhattai Pseudomonas Sp. Bacillus Licheniformis y Brevibacterium Sp) 9 Hongos Patógenicos ( Rhizoctonia Crocorum Phoma Crocoplila Fusarium Moniliforme Macrophomina Phaseolina Fusarium Oxyspo- Rum F. Sp. Solani F. Pallidoroseum F. Equiseti Mucor Sp. Penicillium Sp. Y Sclerotium Rolfsii) y el Nematodo Ditylenchus Dipsaci Todos Limitantes para el Desarrollo del Cultivo del Azafrán. Debido a que hay Información Disponible sobre la Secuencia Genómica de Cada Uno de Estos Patógenos se Analizará mediante la Técnica de Pcr las Secuencias de Dna que Permiten Identificar Cada Uno de Ellos. En el Caso de las Bacterias se Utilizarán Partidores que Amplifiquen el Gen Marcador Ribosomal 16s y para el Caso de Hongos se Emplearán Partidores que Amplifiquen Exclusivamente el Gen Ribosomal 18s y los Its del Gen 18s la Presencia de Productos de Amplificación en los Bulbos Analizados Será Indicativo de la Presencia de Patógenos Contaminantes. Para la Identificación de Estos Patógenos los Productos Obtenidos en Cada Amplificación Serán Clonados y Secuenciados para Realizar los Análisis Bioinformáticos. 4. Análisis Bioinformático de las Secuencias Obtenidas e Identificación de los Patógenos Presentes en las Muestras:una Vez Obtenidas las Secuencias de los Productos de Pcr Amplificados en el Punto Anterior Serán Comparadas con las Secuencias Genómicas de los Patógenos que Afectan el Cultivo de Azafrán Obtenidas de Bases de Datos Públicas (ncbi). el Análisis Filogenético (realizado mediante el Programa Mega 4) Permitirá Identificar los Patógenos Presentes en los Bulbos Contaminados. 5. Informe: se Obtendrá un Informe Detallado con los Resultados de las Muestras de Bulbos Positivas o Negativas para la Presencia de Patógenos Contaminantes Así como la Identidad de Estos. esto Permitirá Identificar Qué Material se Utilizará para Introducir en el Sistema de Propagación In Vitro y Continuar con el Proceso de Producción de Manera Adecuada Generando un Alto Nivel de Producción y Rentabilidad. Resultados Esperados: -se Espera Identificar Bulbos Libres de Patógenos para Utilizar en el Sistema de Propagación In Vitro. -se Espera Mejorar la Cadena Productiva al Reducir las Pérdidas Ocasionadas por el Uso de Material Contaminado.Corporación de Fomento de la Producción