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Utilization of a monoclonal antibody in the diagnosis of infectious pancreatic necrosis virus in fish
Utilización de un anticuerpo monoclonal en el diagnóstico directo e indirecto del virus IPN en peces infectados experimentalmente
Registro en:
10.4067/S0301-732X1999000200010
Autor
CIFUENTES, F.
PUELLE, C.
ESPINOZA, J. C.
CISTERNAS, C.
ENRÍQUEZ, R.
KUZNAR, J.
Institución
Resumen
The infectious pancreatic necrosis virus, IPNV, is the etiological agent of a highly contagious disease that affects young salmon. If they survive, they become carriers and can transmit the disease. To contribute to the fast and effective diagnosis in fish with the acute infection, as well as of carrier fish, the use of a monoclonal antibody in the detection of the virus in experimentally infected animals was studied. Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and coho salmon (Oncorhynchus kisutch) fry infected with a Chilean IPNV isolate were used for the experience. To detect the viral antigens the ELISA immunodot and immunofluorescence methods were used.
The monoclonal antibody used allows the diagnosis of the virus in carriers in less than three days irrespective of whether the sample was obtained from a fish with the acute disease or from carrier fish. In the first case the ELISA and immunodot methods can be applied directly on extracts of whole fish. In the second, the extracts of the carrier fish organs should be amplified during one and a half-day in cultured cells before performing the assays. It was determined also that the time required for IPNV diagnosis in carrier fish can be further shortened if the monolayers were examined for specific immunofluorescence in the infected cells. Additionally, it was proved that carrier fish can be easily detected by means of the direct staining of imprints of organs of suitably sized fish. El virus de la necrosis pancreática infecciosa, virus IPN, es el agente causal de una enfermedad altamente contagiosa que afecta a peces salmonídeos jóvenes, éstos cuando sobreviven pueden convertirse en portadores que pueden transmitir la enfermedad. Para contribuir al diagnóstico rápido y efectivo del virus tanto en peces con la infección aguda, como en peces portadores, es que ensayamos la aplicación de un anticuerpo monoclonal en la detección del virus en animales infectados experimentalmente. Utilizamos alevines de truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) y de salmones coho (Oncorhynchus kisutch) infectados con virus IPN aislado en Chile.
Para detectar a los antígenos virales empleamos ensayos de ELISA inmunodot e inmunofluorescencia. Los resultados muestran que en los peces con la enfermedad aguda el virus se detecta aplicando directamente los inmunoensayos en extractos de peces enteros. En cambio, para detectar al virus en los peces portadores fue necesario incorporar un paso adicional para amplificar al virus en cultivos celulares. A pesar de lo cual, sin embargo, los métodos se optimizaron de manera que el procedimiento completo se realizó en menos de tres días para ELISA e inmunodot y menos de un día y medio para la inmunofluorescencia.
Debido a que la técnica de inmunofluorescencia permite la identificación inequívoca de una o pocas células infectadas, es que ensayamos condiciones para diagnosticar al virus IPN desde improntas de peces portadores del virus. Demostramos que los antígenos virales pueden ser facilmente identificados por medio de la tinción directa de improntas de órganos de peces con el tamaño adecuado.