Desreplicação dos extratos ativos de Cyrtocymura scorpioides (Asteraceae) contra Candida spp. e Trichomonas vaginalis

Abstract

Cyrtocymura scorpioides (Lam.) H. Rob., sinonímia Vernonia scorpioides (Lam) Pers, é uma planta medicinal da América do Sul, sendo utilizada, popularmente, para o tratamento da leucorreia, principal sintoma associado a candidíase vulvovaginal e tricomoníase, que são as doenças causadas por espécies de Candida e Trichomonas vaginalis, respectivamente. C. scorpioides é conhecida popularmente como “piracá”, “erva-de-São-Simão”, “capixingui” e “enxuga” e pertence à família Asteraceae, uma das maiores famílias de angiospermas. Os metabólitos bioativos comumente encontrados em espécies do gênero Cyrtocymura, pertencem às classes das lactonas sesquiterpênicas, poliacetilenos, flavonoides, triterpenoides e esteroides. No presente estudo avaliou-se as atividades antifúngica e antiprotozoária de seis extratos a partir das folhas e caules de C. scorpioides, obtidos em diferentes solventes (hexano, acetona e etanol) contra cinco espécies de Candida (cepas da American Type Culture Collection e isolados clínicos) e uma cepa ATCC de T. vaginalis. Para verificação da atividade antifúngica dos extratos, foram determinados os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicída Mínima (CFM). Para a atividade contra T. vaginalis foi determinada a Concentração Inibitória para 50% dos trofozoítos (CI50) dos extratos que apresentaram viabilidade inferior a 30%, ensaiados a 1000 μg/mL. Todos os extratos foram ativos contra pelo menos três espécies de Candida e seus isolados clínicos (CIM ≤ 1000 μg/mL). O extrato acetônico de caules foi o mais fungitóxico com valores de CIM e CFM entre 125 e 250 μg/mL contra C. albicans (ATCC 64548 e IC001), C. krusei (IC 5772) e C. glabrata (ATCC 2001 e IC 041). Contra T. vaginalis os extratos hexânico e acetônico de caules exibiram baixa viabilidade (< 5%) e valores de CI50 de 0,09 e 0,50 μg/mL, respectivamente. A fim de estudar o perfil químico dos extratos acetônicos de caules e folhas de C. scorpiodes e identificar as substâncias responsáveis pela bioatividade, foi criado uma rede de moléculas a partir de dados espectrais obtidos por Cromatografia Liquída de Ultra Eficiência acoplada a espectrometria de massas de alta resolução (UHPLC-HR/MS). Essa rede de moléculas foi comparada com uma base de espectros de produtos naturais in silico com ponderações taxonômicas. Desta forma 2112 espectros de MS/MS foram organizados em 183 clusters em que foram identificados 1071 substâncias pertencentes a 38 classes químicas. Os clusters MN1 ao MN9 foram selecionados para estudo por conterem, em sua maioria, lactonas sesquiterpênicas e poliacetilênicas. A substância 2 (13-acetilsolstitialina A) identificada no MN1 foi previamente isolada de Centaurea solstitialis (Asteraceae), por outros autores, e apresentou atividade contra C. albicans e C. parapsilosis (CIM = 64 µg/mL). A atividade antifúngica de 2 sugere que essa substância pode ser responsável pela atividade antifúngica de C. scorpioides. Dessa forma, os resultados biológicos e químicos corroboram o uso popular de C. scorpioides contra patógenos causadores de leucorreia e outros sintomas relacionados a doenças ginecológicas.

Cyrtocymura scorpioides (Lam.) H. Rob., synonym Vernonia scorpioides (Lam) Pers., is a medicinal from South America, which has been popularly used to treat leukorrhea, the main symptom associated with vulvovaginal Candidiasis (CVV) and trichomoniasis, which are diseases caused by Candida spp. and Trichomonas vaginalis, respectively. C. scorpioides is popularly known as "piracá", "erva-de-São-Simão", "capixingui" and "enxuga" and belongs to the Asteraceae family, one of the largest families of angiosperms. The bioactive metabolites commonly found in species of the genus Cyrtocymura belong to sesquiterpene lactones, polyacetylenes, flavonoids, triterpenoids and steroids. In the current study, the antifungal and antiprotozoal activities of six extracts from C. scorpioidesleaves and stems obtained in different solvents (hexane, acetone and ethanol). These extracts were evaluated against five species of Candida (strains from American Type Culture Collection and clinical isolates) and one ATCC strain of T. vaginalis. To verify the antifungal activity of the extracts, the values of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) were determined. For the activity against T. vaginalis, the Inhibitory Concentration was determined for 50% of the trophozoites (IC50) of the extracts that showed viability <30%. All extracts were active against at least three species of Candida and their clinical isolates (MIC ≤ 1000 μg/mL). Acetonic extract of stems was the most active one with MIC and MFC values between 125 and 250 μg/mL against C. albicans (ATCC 64548 and CI 001), C. krusei (CI 5772) and C. glabrata (ATCC 2001 and CI 041). Against T. vaginalis, hexanic and acetonic extracts of stems presented low viability (<5%) and IC50 values of 0.09 and 0.50 μg/mL, respectively. In order to study the chemical profile of acetonic extracts of C. scorpiodes leaves and stems and to identify the compound that can be responsible for bioactivity, a molecular network was created from spectral data obtained by Ultra Performance Liquid Chromatography with high resolution Mass Spectrometer (UHPLC -HR/MS). The molecular network was compared to a in silico database of natural products with taxonomical annotation. In this way, 2112 mass spectra were organized in 183 clusters that can be identify 1071 compounds belonging to 38 chemical classes. Clusters MN1 to MN9 were selected for study because they contain, in their majority, sesquiterpene and polyacetylenic lactones. Compound 2 (13-acetylsolstitialin A) identified in MN1 was previously isolated from Centaurea solstitialis (Asteraceae) by other authors and showed antifungal activity against C. albicans and C. parapsilosis (MIC = 64 µg/mL). The antifungal activity of 2 suggests that this compound may be responsible for the antifungal activity of C. scorpioides. The biological and chemical results corroborate the popular use of C. scorpoides against pathogens that causes leukorrhea and other symptoms related to gynecological disorders.