Tesis
Generación y evaluación in vitro de variantes aglicosiladas de eritropoyetina.
Autor
Varas Molina, Nicolás Mauricio Jeset
Institución
Resumen
La eritropoyetina humana (hEPO) es la principal hormona encargada de
estimular la eritropoyesis. Su deficiencia causa anemia severa y ocurre en
pacientes con fallo renal debido a traumas, trasplantes, quimioterapia, diabetes
u otros. Para el tratamiento de estos pacientes es necesario el suministro externo
de la hormona. En la actualidad la eritropoyetina humana recombinante (rhEPO)
es producida en cultivo de células CHO, a pesar del alto costo, debido a que la
producida en otras células u organismos presenta glicosilaciones diferentes y por
tanto una actividad in vivo disminuida. Una alternativa podría ser utilizar rhEPO
sin glicosilaciones, sin embargo, esta variante posee una actividad in vivo casi
nula, a pesar de poseer una mayor actividad in vitro y mayor afinidad por su
receptor (EPOR) que la hEPO nativa. Las glicosilaciones generan limitaciones en
la producción de la rhEPO y las principales ventajas que le otorgan a la hormona
son un aumento de peso molecular y una disminución de la afinidad por EPOR.
Considerando esto, en el presente trabajo generamos y evaluamos variantes de
rhEPO aglicosilada, fusionada al dominio Fc de IgG1 humana y con mutaciones
en los aminoácidos que interactúan con el receptor. Finalmente evaluamos las
variantes generadas mediante ensayo in vitro en la línea celular TF-1 y obtuvimos
que el cambio de fenilalanina 48 por alanina genera una proteína que recupera
un comportamiento in vitro similar a una rhEPO glicosilada.