Desnaturalización térmica de la β-galactosidasa de Kluyveromyces lactis

Abstract

En este trabajo se estudió por dicroísmo circular, una técnica espectroscópica, la desnaturalización térmica de la β-galactosidasa de Kluyveromices lactis, una enzima dimérica, para establecer un posible mecanismo de desplegamiento. El análisis inicial de las curvas de transición térmica de la enzima implica que el proceso se encuentra bajo control cinético y cumple con un modelo irreversible simple de dos estados, las curvas obtenidas se ajustan a un proceso monofásico. Sin embargo, un análisis más profundo de dichas curvas de transición conduce a que la desnaturalización sigue un modelo irreversible más complejo, el cual implica la presencia de intermediarios. Se propone que en una primera etapa la proteína se disocia de dímero a dos monómeros en forma irreversible, recordando que las cadenas polipeptídicas no son iguales, y después cada uno de ellos se desnaturaliza de forma irreversible.

In this work the thermal denaturation of the β-galactosidase of Kluyveromices lactis, a dimer enzyme, was studied by circular dichroism, a spectroscopic technique, to establish a possible unfolding mechanism. The initial analysis of the thermal transition curves of the enzyme implies that the process is under kinetic control (consistent with a two-state model). However, when a more detailed analysis of such transition curves was made, it leads to denaturation following a more complex irreversible model. It is proposed that in a first step the protein dissociates from dimer to two monomers irreversibly. Polypeptide chains have different mass. Then each of them is irreversibly denatured.