Orientador: Juliana Trindade Clemente NapimogaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O tramadol é um fármaco potente para o tratamento de condições dolorosas. No entanto, não há estudos que suportam o efeito periférico anti-inflamatório do tramadol quando administrado localmente na articulação temporomandibular (ATM). O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito periférico anti-inflamatório do tramadol através da indução da dor inflamatória na ATM de ratos e elucidar os mecanismos envolvidos. Ratos machos Wistar foram tratados com uma injeção intra-articular de tramadol (125, 250, 500 ou 1000 µg/ATM) coadministrado com formalina 1,5% ou capsaicina 1,5%. Os animais também foram pré-tratados (15 min) com uma injeção intra-articular do antagonista não seletivo de receptores opióides (naloxona, 10 µg/ATM), inibidor seletivo da PI3K (AS605240; 30 µg/TMJ), inibidor seletivo de AKT (inibidor de AKT IV; 10 µg/ATM), inibidor de óxido nítrico sintase (L-NMMA, 450 µg/ATM), inibidor da enzima solúvel GMPc (ODQ, 80 µg/ATM), inibidor da PKG (KT5823, 1,5 µg/ATM) ou bloqueador de canais de potássio sensíveis ao ATP (glibenclamida, 160 µg/ATM) seguido de uma injeção intra-articular de tramadol (500 µg /ATM) com formalina 1,5%. Em outra linha de experimentos, os animais foram pré-tratados (15 min) com uma injeção intra-articular de tramadol (125, 250 e 500 µg /ATM) seguido por: (1) injeção intra-articular de carragenina (100 µg/ATM) 1 hora antes da injeção intra-articular de uma dose sublimiar de 5-hidroxitriptamina (5-HT, 75 µg/ATM) ou (2) injeção intra-articular de 5-HT (225 µg/ATM). Após os tratamentos as respostas nociceptivas comportamentais foram avaliadas e em seguida os animais foram eutanasiados e os tecidos periarticulares coletados para análises. A injeção intra-articular de tramadol 250, 500 e 1000, mas não 125 µg/ATM reduziu significativamente as respostas comportamentais nociceptivas induzida pela formalina 1,5% (P<0,05). A injeção intra-articular na ATM contralateral de tramadol (1000 µg /ATM) não afetou as respostas comportamentais nociceptivas induzida pela formalina 1,5% (P>0,05) comprovando o efeito periférico do tramadol. A injeção intra-articular de tramadol (500 µg/ATM) reduziu significativamente as respostas comportamentais nociceptivas induzida pela capsaicina 1,5% (P<0,05), sugerindo que o tramadol tenha efeito direto nas fibras c-nociceptivas. O pré-tratamento com LNMMA e ODQ, mas não naloxona, AS605240, inibidor de AKT IV, KT5823 e glibenclamida reduziu significativamente o efeito antinociceptivo periférico induzido pela injeção intra-articular de tramadol (500 µg/ATM) (P<0,05), sugerindo que o tramadol depende da ativação da via intracelular ON/GMPc de forma independente de receptores opióides. O pré-tratamento com tramadol 500, mas não 250 e 125 µg/ATM reduziu significativamente as respostas comportamentais nociceptivas induzida pela carragenina e/ou 5-HT (P<0,05). A injeção intra-articular de tramadol (500 µg/ATM) não afetou a expressão de ICAM e CD55 (P>0,05) mas reduziu significativamente a liberação das citocinas inflamatórias TNF-? e IL-1?, mas não IL-10 induzidas pela formalina 1,5% ou carragenina (P<0,05). O pré-tratamento com tramadol (125, 250 e 500 µg/ATM) reduziu significativamente a migração leucocitária e o extravasamento plasmático induzido pela carragenina (P<0,05). Assim, os resultados sugerem que o tramadol possui um potente efeito anti-inflamatório ao reduzir a quimiotaxia inflamatória e este efeito está associado a ativação da via intracelular ON/GMPcAbstract: Tramadol is a potent drug to treat pain conditions. However, there are no studies supporting the peripheral anti-inflammatory effect of tramadol when administered locally in the temporomandibular joint (TMJ). Thus, the aim of this study was evaluate the peripheral anti-inflammatory effect of tramadol through the induced inflammatory pain in the rats TMJ and elucidate the mechanisms involved. Male Wistar rats were treated with an intra-articular injection of tramadol (125, 250, 500 or 1000 µg/TMJ) co-administrated with 1.5% formalin or capsaicin 1.5%. Animals were pretreated (15 min) with an intra-articular injection of non-selective antagonist of opioid receptors (Naloxone, 10 µg/TMJ); or selective inhibitor of PI3K (AS605240; 30 µg/TMJ); or selective inhibitor of AKT (AKT inhibitor IV; 10 µg/TMJ); or inhibitor of nitric-oxide synthase (L-NMMA; 450 µg/TMJ); or inhibitor of soluble cGMP enzyme (ODQ; 80 µg/TMJ); or inhibitor of PKG (KT5823; 1.5 µg/TMJ); or the ATPpotassium sensitive channel blocker (Glibenclamide; 160 µg/TMJ) followed of an intra-articular injection of tramadol (500 µg/TMJ) with 1.5% formalin. In another set of experiments, the animals were pretreated (15 min) with an intra-TMJ injection of tramadol (125, 250 and 500 µg/TMJ) followed by: (1) an intra-TMJ injection of carrageenan (100 µg/TMJ) 1 hour prior an intra-articular injection of a low dose of 5-hidroxytryptamine (5-HT, 75µg/TMJ) or (2) an intra-articular injection of 5-HT (225 µg/TMJ). After TMJ treatments, the behavioral nociception responses were evaluated then the animals were euthanized and the periarticular tissues removed for analysis. The intra-articular injection of tramadol 250, 500 and 1000 but not 125 µg/TMJ significantly reduced behavioral nociceptive responses induced by 1.5% formalin (P<0.05). The contralateral intra-articular injection of tramadol (1000 µg/TMJ) did not affect the 1.5% formalin-induced behavioral nociceptive responses (P>0.05) confirming the peripheral effect of tramadol. The intra-articular injection of tramadol (500 mg/TMJ) significantly reduced the capsaicin-induced behavioral nociceptive responses (P<0.05) suggesting that tramadol has a direct effect on nociceptive C-fibers. The pretreatment with L-NMMA and ODQ but not naloxone, AS605240, AKT inhibitor IV, KT5823 and glibenclamide significantly reduced the peripheral antinociceptive effect induced by intra-articular injection of tramadol (500 µg/TMJ) (P<0.05). These results suggest that tramadol depends on the activation of intracellular NO/cGMP pathway independently of opioid receptors. The pretreatment with Tramadol 500 but not 250 and 125 µg/TMJ significantly reduced behavioral nociceptive responses induced by carrageenan or 5-HT (P<0.05). The intra-articular injection of tramadol (500 µg/TMJ) did not affect the expression of ICAM and CD55 (P>0.05) but significantly reduced the release of inflammatory cytokines TNF-? and IL-1? induced by 1.5% formalin or carrageenan (P<0.05). The pretreatment with tramadol (125, 250 and 500 µg/TMJ) significantly reduced carrageenan-induced leukocytes migration and plasma extravasation (P<0.05). The results suggest that tramadol has a potential anti-inflammatory effect by reducing the inflammatory chemotaxis thought intracellular activation of the NO/cGMP pathwayDoutoradoFisiologia OralDoutora em Odontologia2013/11090-0FAPESP