Entre las infecciones nosocomiales comunes se encuentra la candidosis, una micosis infecciosa no contagiosa producida por especies de levaduras pertenecientes al género Candida spp. El agente etiológico más importante es Candida albicans, comensal de las mucosas del ser humano, que produce infección generalmente limitada en la piel, las uñas, las mucosas y el tracto gastrointestinal, o bien, infecciones sistémicas que comprometen estructuras profundas y órganos internos, manifestándose como la micosis oportunista más frecuente. El presente trabajo se enfocó a relacionar dos conceptos que hoy en día son de gran importancia; las infecciones nosocomiales y las candidosis. Es muy común encontrar pacientes que ingresan al hospital por una afección y han tenido que aumentar su estancia por complicaciones de este tipo, que son infecciones causadas por patógenos oportunistas que aprovechan el deficiente estado de respuesta inmunológica del paciente para causar una alteración, modificando las condiciones homeostáticas en las zonas colonizadas. Es por ello que con esta investigación se pretende realizar una aportación a los métodos tradicionales para un diagnóstico oportuno. La actividad proteolítica está muy ligada a los factores de virulencia, los cuales varían de una especie a otra, siendo este un dato importante en el presente trabajo puesto que en la actualidad es muy común encontrar especies que tienen cierta semejanza en algunos aspectos, por ejemplo Candida albicans y Candida stellatoidea en múltiples ocasiones son utilizadas como sinónimos. El ensayo de actividad proteolítica permite diferenciar entre las dos especies como se muestra en los resultados observándose mayor actividad en la segunda especie y mostrando la utilidad de este ensayo para apoyar un diagnóstico temprano realizado mediante pruebas rápidas como son Tubo Germinativo y Agar Cromogénico, lo cual nos permitirá una mejor identificación y, por consecuencia, un tratamiento oportuno para el paciente. Material y Métodos: Se caracterizaron 50 cepas de levaduras provenientes de pacientes con infección nosocomial, para la identificación rápida de Candida albicans; se determinó la prueba de Filamentación (Tubo Germinativo), Auxonograma y Microzimograma (variante de Zimograma tradicional) y, finalmente, la actividad proteolítica siguiendo el ensayo de Aoki, quien propone un medio sintético compuesto por sales minerales, extracto de levadura, glucosa, albúmina sérica bovina y agar – agar. Resultados: El 30% de las cepas fueron positivas a la prueba de filamentación y alternando con las pruebas tradicionales se determinó que el 20% corresponde al género C. albicans, 16% al C. tropicalis, 12% al C. pseudotropicalis, 10% corresponden a C.stellatoidea, 10% a C. glabrata, 10% a C. parapsilosis, 8%a C. kruzei, 4% a C. guillermondi, 4% a C. dubliniensis, 4% a C.lipolitica, y 2% a C.famata. Se encontraron variaciones en los valores de actividad proteolítica, podrían deberse a que, con el paso del tiempo, los microorganismos van modificando la secuencia del material genético mediante mutaciones creando resistencia a ciertos antifúngicos. Conclusiones: Las especies de Candida se pueden identificar de acuerdo con su capacidad de filamentación; sin embargo para confirmar estos datos en la clínica, las pruebas tradicionales siguen siendo importantes aun cuando son más tardadas. Mientras que, con la actividad proteolítica, se ocupa menos tiempo, lo cual resultaría un método alternativo para la pronta identificación del agente causal de infección nosocomial, permitiendo con ello la elección de mejores terapias antimicrobianas. Se recomienda realizar un estudio con Reacción en Cadena de la Polimerasa, por sus siglas en inglés PCR (Polymerase Chain Reaction), para identificar las proteasas como parte confirmativa de los resultados, además de identificar genes de resistencia a los antifúngicos disponibles para tratar estos problemas