Evaluación de cinco modificaciones de la técnica de Gram para la identificación de bacterias en tejido sometidos a procesamiento histológico de rutina

Abstract

La tinción de Gram se usa como orientación en el diagnóstico y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos según reaccionen a la tinción: Gram positivo y Gram negativo, convirtiéndola así en una importante herramienta taxonómica y diagnóstica. En este trabajo se evaluaron cinco modificaciones a la técnica de Gram para la identificación de bacterias en muestras de tejido humano fijado en formalina e incluido en parafina: Hucker y Conn, Mc Callum - Goodpasture, Brown y Brenn, Jensen y Taylor. Se utilizaron cortes de 4um de 20 muestras de tejido con diagnósticos positivos para bacterias Gram positivo y Gram negativo. Se realizaron las 5 modificaciones a evaluarlas en cada una de muestras. Se utilizaron controles positivos externos de cultivos frescos de bacterias y muestra histológica con bacterias. Las láminas fueron evaluadas por 4 observadores en ciego, considerando los parámetros de detectabilidad e identificación de bacterias; donde se evalúo la morfología bacteriana, intensidad de la tinción y cantidad de bacterias. El método Hucker y Conn, es el que presentó mayor cantidad de muestras con óptima detectabilidad de bacterias (60%), además permitió su realización en borrel una vez que se estandarizaron los tiempos de tinción y diferenciación, produciendo un ahorro sustancial de tiempo a la hora de teñir varias láminas y evitando el problema de coloración dispareja que produce la tinción en placa. La técnica Brown y Brenn, fue la segunda mejor evaluada en detectabilidad e intensidad de la tinción. El buen resultado de ambas técnicas, no es atribuible a la concentración de cristal violeta utilizado, sino al uso de oxalato de amonio (Hucker y Conn) y bicarbonato de sodio (Brown-Brenn) que le otorgan un pH alcalino a la solución, estabilizándola y logrando una mejor tinción de las bacterias Gram positivo. Los métodos Jensen y Taylor, fueron los únicos que mostraron resultados con tinción inadecuada.