masterThesis
Estudos da aplicação do corante azul de metileno em terapia fotodinâmica
Autor
Peloi, Lilian Somenci
Institución
Resumen
The Photodynamic Therapy (PDT) is a medical modality that utilizes a combination of a photosensitizer compound, visible light and oxygen. Its largest application is in the treatment of cancer, however, this technical is being diffused far handling other illnesses including microbial infections. Despite of the wide applicability of the TFD, two factors difficult its dissemination: the high cost of the medicines and the light source. The option of dyes as the photodynamic agents is interesting due to the lower cost and possibilities, of application being an example the Methylene Blue (MB). This dye absorbs in the red region of the visible absorption spectra and produces high level of singlet oxygen. Beyond that, it is already utilized in the medical area, for example, to treat metahemoglobinemia, and has been considered a medication for PDT. In the case of equipment, the replacement of the LASER by LED units as light source should be investigated. In that way the MB was investigated in association with LED light as an alternative for PDT. It was investigated the photoactivity of MB in cultures of microorganisms and Artemia salina and in the handling of the American Tegumentar Leishmaniosis. The Methylene Blue has a maximum absorption in 663 nm (inside the phototherapeutic windows for PDT); suffers almost no photobleaching reaction and exhibits a good value of photodynamic activity (PA). This last parameter was calculated considering the fact of the LED be a nonmonocromatic light source, leading us to modify the equation traditionally employed for LASER systems in the calculations of PA. The apparatus of LED system developed was highly convenient for the proposed application with the MB dye. The photoactivity of MB/LED was investigated using the bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli, and the fungus Candida albicans. A tiny microcrustaceous Artemia salina was also tested. All the microorganisms studied mesented inhibitory growth activity and killing effect in presence of MB (in the dark), being this action intensified with the LED light irradiation. The intensity of effect using MB/LED was similar for ali of the microorganisms. Equally with Artemia salina the percentage of death was higher in the irradiated samples. To American Tegumentar Leishmaniosis (LTA) is one of the parasitic disease of largest incidence in the world and in the conventional treatment employ some costly medicines which show severe colateral effects. The investigation for LTA through LED in association with MB, was carried out in vitro, in attempt promastigotes and amastigotes forms of Leishmania (Viannia) braziliensis and, in vivo with Leishmania (Leishmania) amazonensis infected in hamsters. The results in vitro show that the combination of MB and light inhibited the growth of forms promastigotes in culture and reduced the capacity of infection of the promastigotes in macrofhages. The results in vivo show that the system MB/LED reduced the lesion of the infected paw and the parasitic load in the hamsters. The good results showed in the treatment applied against microorganisms and leishmaniosis, in vitro and in vivo with the MB/LED, pointed out that this therapy is very interesting and can be a future alternative in the clinical handling of patients. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade médica que utiliza a combinação de luz visível, composto fotossensível e oxigênio. A maior aplicação da TFD é no tratamento de câncer, entretanto, a técnica está sendo difundida no tratamento de outras doenças incluindo-se infestações microbianas. Apesar da larga aplicabilidade da TFD, dois fatores dificultam a disseminação do tratamento: o alto custo dos medicamentos e da fonte de luz. A opção de corantes como agentes fotodinâmicos é interessante devido ao custo reduzido e aplicabilidade, sendo um exemplo o azul de metileno (AM). Este corante absorve na região de luz vermelha e produz oxigênio singlete. Além disso, já é bastante utilizado na área médica, por exemplo, para o tratamento de metahemoglobinemia, e tem sido considerado um fármaco para TFD. No caso dos equipamentos, a substituição do LASER por dispositivos de LED deve ser investigada. Assim estudou-se algumas propriedades do AM como fotossensitizador bem como o uso de LED como uma alternativa para TFD. Investigou-se a ação fotodinâmica em culturas de microrganismos e Artemia salina e no tratamento da Leishmaniose Tegumentar Americana. O azul de metileno tem um máximo de absorção na região de 660 nm (na janela fototerapêutica para TFD); sofre pouca reação de fotobranqueamente e exibiu um bom valor de atividade fotodinâmica. Este último parâmetro foi calculado levando-se em consideração o fato do LED ser uma fonte de luz policromática, levando nos a modificar a equação tradicionalmente empregada para sistemas LASER nos cálculos de atividade fotodinâmica. O sistema de LED desenvolvido foi altamente conveniente para as aplicações propostas com o corante AM. O efeito fotodinâmico foi testado sobre Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans e Artemia salina. As cepas estudadas sofreram efeito inibitório no crescimento e mortandade na presença de azul de metileno (no escuro), sendo este intensificado com aplicação da luz LED. A resposta AM/LED foi similar para todos os microrganismos. Igualmente com Artemia salina o percentual de morte foi superior nas amostras irradiadas. A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma das doenças parasitárias de maior incidência no mundo, cujo tratamento convencional emprega medicamentos caros e com sérios efeitos colaterais. A investigação para LTA através de LED em associação com AM, foi realizada in vitro, em ensaios sobre as formas promastigotas e amastigotas com Leishmania (Viannia) braziliensis e, in vivo com Leishmania (Leishmania) amazonensis em hamsters infectados. Os resultados dos experimentos in vitro mostram que o tratamento com AM e luz inibiu o crescimento de formas promastigotas em cultura e reduziu a capacidade de infecção das promastigotas em macrófagos. Os resultados in vivo mostram que o sistema AM/LED reduziu a lesão das patas infectadas e a carga parasitária nos hamsters. Assim os bons resultados do tratamento aplicado contra microrganismos e leishmaniose, in vitro e in vivo com AM/LED, confirma que a TFD é altamente promissora podendo vir a ser uma alternativa no tratamento clínico de pacientes. 67 f