Dissertação
Influência da remoção do plasma seminal na criotolerância do sêmem ovino
Influence of seminal plasma removal on cryotolerance of sheep semen
Registro en:
DACAMPO, Lucas Dalle Laste. Influência da remoção do plasma seminal na criotolerância do sêmem ovino. 47. p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) – Universidade Federal do Pampa, Campus Uruguaiana, Uruguaiana, 2019.
Autor
Dacampo, Lucas Dalle Laste
Institución
Resumen
Semen cryopreservation technique has allowed the formation of genetic banks and the
commercialization of gametes and embryos in different species. However, sheep cryopreserved
semen when used in a cervical artificial insemination or laparoscopy presents unsatisfactory
results, such as low pregnancy rate, high cos and lack of specialized labor. Given this, some
alternatives are needed to reduce injuries to the cells, such as the removal of seminal plasma,
which is already routine in other species. The aim of this study was to evaluate the influence of
seminal plasma on semen quality during cryopreservation of sheep semen. The ejaculate of four
ram was collected and evaluated for volume, color, appearance, motility. Subsequently, a pool
with the ejaculates was performed and split into three groups: Control Group (CG) where
semen was diluted in a traditional form, Without Seminal Plasma (WSP) in which semen was
centrifuged at 4000 x g for plasma removal, and Centrifuged Control (CC) in which semen was
centrifuged but not plasma withdrawn. Semen was diluted in commercial extender (OptixcellTM
IMV medium), filled in 0.25mL straws at a final concentration of 400x106
sperm / mL, and
straws were cooled at 5 °C for 2 hours, then exposed to nitrogen vapor for 15 minutes and
stored. at -196 °C. After cryopreservation the straws were thawed at 37 °C for 20 seconds and
the following evaluations were performed: sperm kinetics, plasma and acrossomal membrane
integrity, mitochondrial viability, DNA fragmentation, sperm morphology, oxidative stress and
fecundating capacity. The CC group was inferior to the CG and WSP groups in total and
progressive motility (P = 0.05), fast (P = 0.05) and slow motility (P = 0.03). The acrosomal
integrity was higher in the WSP group (P = 0.05) when compared to the CG and CC. Therefore,
the removal of seminal plasma did not influence the quality of ram semen. The sperm kinetics
was not affected and the WSP group preserved the integrity of the acrosomal membrane during
cryopreservation, however, did not increase the fecundating capacity of sperm. A técnica de criopreservação permite a formação de bancos genéticos e a
comercialização de gametas e embriões em diferentes espécies. Porém, o sêmen criopreservado
ovino quando utilizado na inseminação artificial cervical ou por laparoscopia apresenta
resultados insatisfatórios, como baixo índice de prenhez, alto custo e falta de mão de obra
especializada. Diante disso, são necessárias algumas alternativas para diminuir as injúrias a
essas células, como a retirada do plasma seminal, que já é uma prática comum em outras
espécies. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do plasma seminal na qualidade
espermática durante a criopreservação de sêmen ovino. O ejaculado de quatro carneiros foi
coletado e avaliado quanto ao volume, cor, aspecto e motilidade. Posteriormente, foi realizado
um pool com os ejaculados e dividido em três grupos: Controle (GC) onde o sêmen foi diluído
de maneira tradicional, Sem Plasma Seminal (SPS) no qual o sêmen foi centrifugado a 4000 x
g por 10 minutos para a remoção do plasma, e Controle Centrifugado (CC) em que o sêmen foi
centrifugado porém não teve seu plasma retirado. O sêmen foi diluído em diluente comercial
(OptiXcellTM, IMV medium), envasado em palhetas de 0,25 mL em concentração final de
400x106
espermatozoides/mL, sendo as palhetas resfriadas a 5oC por 2 horas, posteriormente
expostas ao vapor de nitrogênio por 15 minutos e estocadas a -196oC. Após a criopreservação
as palhetas foram descongeladas a 37°C por 20 segundos e as seguintes avaliações foram
realizadas: cinética espermática, integridade de membrana plasmática e acrossomal, viabilidade
mitocondrial, fragmentação de DNA, morfologia espermática, estresse oxidativo e capacidade
fecundante. O grupo CC foi inferior aos grupos GC e SPS quanto a motilidade total e
progressiva (P= 0,05), espermatozoides rápidos (P=0,05) e lentos (P=0,03). A integridade
acrossomal foi superior no grupo SPS (P=0,05) quando comparada aos grupos CC e CG.
Portanto, a remoção do plasma seminal não influenciou a qualidade do sêmen de carneiro. A
cinética espermática não foi afetada e o grupo SPS preservou a integridade da membrana
acrossomal durante a criopreservação, no entanto, não incrementou a capacidade fecundante
dos espermatozoides.