Caracterização fisico-químico e atividade antiparasitária da BmatTX-IV, uma fosfolipase A2 básica do veneno de Bothrops mattogrossensis do Paraguai
Registro en:
DÍAZ, Jorge Javier Afonso. Caracterização fisico-químico e atividade antiparasitária da BmatTX-IV, uma fosfolipase A2 básica do veneno de Bothrops mattogrossensis do Paraguai. 2015. 76 f. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental Fundação Universidade Federal de Rondônia, Porto Velho, RO.
Autor
Díaz, Jorge Javier Afonso
Calderon, Leonardo de Azevedo
Vega, María Celeste
Institución
Resumen
Dissertação apresentada à Universidade Federal De
Rondônia, como requisito para obtenção do título de
Mestre em Biologia Experimental no Programa de Pós-
Graduação em Biologia Experimental. Orientador: Dr. Leonardo de Azevedo Calderon
Co-Orientador: María Celeste Vega As serpentes da família Viperidae possuem glândulas salivares especializadas produtoras de
uma mistura diversificada de proteínas com grande variedade de efeitos farmacológicos. A
caracterização dos componentes bioativos destas secreções representam uma ferramenta
importante para a melhor compreensão desses efeitos nas diversas manifestações clinicas do
envenenamento e potencias aplicações biotecnológicas. Este trabalho tem como objetivo
purificar uma fosfolipase básica do veneno de Bothrops mattogrossensis provenientes do
Paraguai (BmatTX-IV), realizar sua caracterização físico-química, e avaliar sua atividade
antiparasitária contra Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi, assim como seu potencial
citotóxico em fibroblastos murinos. A BmatTX-IV foi isolada em alto grau de pureza
mediante uma cromatografia de troca catiônica (CM-Sepharose) seguida por uma
cromatografia de fase reversa (C18). A análise por espectrometria de massa MALDI-TOF e
SDS-PAGE 2D demonstraram uma proteína com valor de m/z de 13.555,82 e pI de 9,3.
Posteriormente, mediante sequenciamento, foram obtidos 81 resíduos de aminoácidos
apresentando um resíduo de Lisina na posição 49, característico ao grupo das fosfolipases
enzimaticamente inativas (Lys49). Adicionalmente, o alinhamento múltiplo de sequência
revelou alto grau de similaridade com outras fosfolipases deste grupo. O veneno revelou alta
atividade antiparasitária in vitro contra formas promastigotas de Leishmania infantum, assim
como contra formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, apresentando inibição superior a
90% nas maiores concentrações testadas. Por outro lado, a BmatTX-IV foi capaz de inibir o
crescimento de L. infantum e T. cruzi em aproximadamente 40% na concentração de 100
μg/mL, sugerindo que outras moléculas presentes no veneno podem estar atuando em sinergia
com as fosfolipases. Finalmente, foram desenvolvidos testes de citotoxicidade do veneno e da
BmatTX-IV contra fibroblastos murinos, o que demonstrou alta citotoxicidade do veneno,
enquanto que a BmatTX-IV apresentou 40% nas concentrações de 100 e 50 μg/mL,
determinando que nos modelos testados não há seletividade do veneno e da toxina em relação
a sua atividade toxica.