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        Caracterização fisico-químico e atividade antiparasitária da BmatTX-IV, uma fosfolipase A2 básica do veneno de Bothrops mattogrossensis do Paraguai

        Registro en:
        DÍAZ, Jorge Javier Afonso. Caracterização fisico-químico e atividade antiparasitária da BmatTX-IV, uma fosfolipase A2 básica do veneno de Bothrops mattogrossensis do Paraguai. 2015. 76 f. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental Fundação Universidade Federal de Rondônia, Porto Velho, RO.
        http://www.ri.unir.br/jspui/handle/123456789/2126
        https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9198024
        Autor
        Díaz, Jorge Javier Afonso
        Calderon, Leonardo de Azevedo
        Vega, María Celeste
        Institución
        • Universidade Federal de Rondônia (Brasil)
        Resumen
        Dissertação apresentada à Universidade Federal De Rondônia, como requisito para obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental no Programa de Pós- Graduação em Biologia Experimental. Orientador: Dr. Leonardo de Azevedo Calderon Co-Orientador: María Celeste Vega
         
        As serpentes da família Viperidae possuem glândulas salivares especializadas produtoras de uma mistura diversificada de proteínas com grande variedade de efeitos farmacológicos. A caracterização dos componentes bioativos destas secreções representam uma ferramenta importante para a melhor compreensão desses efeitos nas diversas manifestações clinicas do envenenamento e potencias aplicações biotecnológicas. Este trabalho tem como objetivo purificar uma fosfolipase básica do veneno de Bothrops mattogrossensis provenientes do Paraguai (BmatTX-IV), realizar sua caracterização físico-química, e avaliar sua atividade antiparasitária contra Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi, assim como seu potencial citotóxico em fibroblastos murinos. A BmatTX-IV foi isolada em alto grau de pureza mediante uma cromatografia de troca catiônica (CM-Sepharose) seguida por uma cromatografia de fase reversa (C18). A análise por espectrometria de massa MALDI-TOF e SDS-PAGE 2D demonstraram uma proteína com valor de m/z de 13.555,82 e pI de 9,3. Posteriormente, mediante sequenciamento, foram obtidos 81 resíduos de aminoácidos apresentando um resíduo de Lisina na posição 49, característico ao grupo das fosfolipases enzimaticamente inativas (Lys49). Adicionalmente, o alinhamento múltiplo de sequência revelou alto grau de similaridade com outras fosfolipases deste grupo. O veneno revelou alta atividade antiparasitária in vitro contra formas promastigotas de Leishmania infantum, assim como contra formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, apresentando inibição superior a 90% nas maiores concentrações testadas. Por outro lado, a BmatTX-IV foi capaz de inibir o crescimento de L. infantum e T. cruzi em aproximadamente 40% na concentração de 100 μg/mL, sugerindo que outras moléculas presentes no veneno podem estar atuando em sinergia com as fosfolipases. Finalmente, foram desenvolvidos testes de citotoxicidade do veneno e da BmatTX-IV contra fibroblastos murinos, o que demonstrou alta citotoxicidade do veneno, enquanto que a BmatTX-IV apresentou 40% nas concentrações de 100 e 50 μg/mL, determinando que nos modelos testados não há seletividade do veneno e da toxina em relação a sua atividade toxica.
         
        Materias
        Fosfolipase A2 Lys49
        Atividade antiparasitária
        Trypanosoma cruzi
        Leishmania infantum
        Citotoxicidade

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