Avaliação da expressão gênica comparativa dos genes γGCS, GSH2, TRYR e ODC em isolados de Leishmania de pacientescom Leishmaniose Tegumentar Americana
Autor
Mattos, Cristiane Batista
Ferreira, Ricardo de Godoi Mattos
Institución
Resumen
Dissertação apresentada ao Programa de Pós graduação em Biologia Experimental Stricto senso da Universidade Federal de Rondônia, para obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Dr. Ricardo de Godoi Mattos Ferreira A leishmaniose é uma doença de caráter antropozoonótico presente em regiões tropicais e subtropicais. Cerca de 1,3 milhões de novos casos são notificados anualmente em 98 países, com aproximadamente 30 mil mortes por ano. A Leishmaniose tegumentar (LT) apresenta diversas manifestações clínicas, as mais frequentes são a leishmaniose cutânea e a leishmaniose mucosa, provocadas por espécies do gênero Leishmania, dentre elas Leishmania braziliensis, L. guyanensis e L. amazonensis. O tratamento de LT é feito com antimoniais pentavalentes (SbV), porém nos últimos anos tem aumentado o número de casos de resistência ao tratamento. Os genes yGCS, ODC, GSH2 e TRYR codificam proteínas com funções envolvidas no metabolismo da droga. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a expressão gênica comparativa desses genes em cepas de Leishmania de pacientes atendidos no Hospital de Medicina Tropical de Rondônia – CEMETRON. Foram analisadas 22 cepas de L. braziliensis e 15 de L. guyanensis realizadas em ensaios de PCR em tempo real. Foi obtido o perfil da curva de crescimento das duas espécies analisadas para realizar a coleta de RNA nas fases logarítmica tardia e estacionária. A concentração ideal dos iniciadores para os genes e a eficiência de cDNA foram obtidas para padronização da técnica utilizada. O gene ODC apresentou maior expressão entre os genes avaliados e o gene yGCS apresentou a menor expressão. Entre as espécies de Leishmania foi observada variação significativa nos genes yGCS e ODC. Os genes GSH2 e TRYR não apresentaram variação significativa na expressão em nenhuma das variáveis analisadas. Entre as fases logarítmica tardia e a estacionária (de L.b e L.g) não foi observada diferença significativa. Quando comparada a expressão gênica entre cultura e RNA extraído da lesão foi observada variação significativa para os genes yGCS e ODC. Em todas as análises, inclusive no heatmap foi observada variação na expressão gênica intra espécie. A partir dos resultados obtidos, fica reforçada a importância da obtenção de informações clínicas dos pacientes em relação a cura clínica ou falha terapêutica e visando compará-las com dados de expressão gênica dos isolados e os dados de expressão gênica obtidos do RNA extraídos da lesão.