The aim of this work was to investigate the immobilization of the commercial Aspergillus oryzae β-galactosidase enzyme (Deslac®) under different conditions, as well as to characterize the free and immobilized enzyme using its application in lactose hydrolysis. The experiments were conducted to identify the best yield of immobilization in calcium alginate and the use of different adjuvants. The free and immobilized enzyme were characterized as to their biochemical properties, to identify the optimum pH and temperature conditions for the lactose hydrolysis reaction, the effect of salts on the enzymatic activity and enzyme storage stability. Enzymes were analyzed to moisturize whey and whole milk. Immobilization of the enzyme β-galactosidase yields better derivative inalginate (2% w/v), glutaraldehyde(25% v/v) crosslinked pectin (2% w/v). The optimal pH to hydrolysis lactose using a soluble and immobilized enzyme was 5.0 and 6.5, respectively, and the optimum temperature was 45 °C and 40 °C, respectively. The use of magnesium sulfate and manganese sulfate influenced enzymatic activity by 195% and 150%, respectively, for an immobilized enzyme. The immobilized enzyme showed 60% stability after 10 days of storage. The immobilization process with sodium alginate + pectin and glutaraldehyde reduced diffuse effects compared to conventional alginate. The reduction of the temperature optimal activity allows a more energy-efficient process.Este trabalho teve como objetivo principal investigar a imobilização da enzima β- galactosidase comercial de Aspergillusoryzae(Deslac®) em diferentes condições, bem como caracterizar a enzima livre e imobilizada visando sua aplicação na reação de hidrólise da lactose. Os experimentos foram conduzidos para identificar o melhor rendimento daimobilização em alginato de cálcio e o uso de diferentes adjuvantes. A enzima livre e imobilizada foram caracterizadas quanto às suas propriedades bioquímicass para identificar as condições reacionais adequadas de pH e temperatura para a reação de hidrólise da lactose, a ação de sais sobre a atividade enzimática, estabilidade de estocagem da enzima. As ezimas foram analisadas para a hidrólise de soro de leite e leite integral. A imobilização da enzima β- galactosidase obtevermelhor derivado com alginato (2% m/v), pectina (2%m/v) reticulada com glutaraldeído (25% v/v). O pH ótimo para a hidrólise da lactose usando a enzima solúvel e imobilizada foi 5,0 e 6,5 respectivamente e a temperatura ótima foi 45°C e 40°C, respectivamente. A utilização dos sais sulfato de magânes e sulfato de manganês influenciaram na atividade enzimática em 195% e 150%, respectivamente, para a enzima imobilizada. A enzima imobilizada apresentou estabilidade de 60% após 10 dias de armazenamento. O processo de imobilização com alginato de sódio+pectina e glutaraldeído reduziu os efeitos difusionais comparados com o alginato convencional. A reduação da temperatura ótima de atividade permite um processo energeticamente mais viável.