Artigo Científico
Fluorimetria para quantificação e viabilidade de promatigotas de Leishmania infantum no cultivo in vitro
Fluorimetry for quantification and viability of Leishmania infantum promatigotes in in vitro culture
Autor
Silva, Nathalia
Institución
Resumen
Os estudos dos parasitas pertencentes à Leishmania envolvem o cultivo in vitro de
formas microscópicas do parasita, as promastigotas. Em geral, o cultivo é monitorado
pelo número de parasitas em crescimento, mas este método envolve quantificação
morfológica e não podem ser automatizados. Uma solução alternativa para este método seria a quantificação não morfológica do agente, por meio da quantificação do DNA em uma cultura pura, o que seria útil em ensaios de triagem de drogas para estas doenças negligenciadas. A fluorimetria é uma técnica que utiliza corantes intercalantes em ácidos nucleicos, que adquirem fluorescência ao se ligarem a sua estrutura secundária. Existem vários agentes intercalantes e a fluorimetria, decorrente da sua interação com promastigotas permitiria uma quantificação rápida, sensível e automatizada. Além disso, os compostos apresentam diferentes graus de penetração em células vivas ou mortas, o que poderia indicar a viabilidade das promastigotas. Nesse projeto, pretende-se comparar a quantificação de promastigotas padronizada por métodos morfológicos com a dosagem fluorimétrica de seu DNA, em sistema utilizando brometo de etídio, laranja de acridina e Hoeschst 3325. Ressalta-se que estes são agentes intercalantes de DNA com diferentes padrões de fluorescência e de permeação celular, para criar uma reação que pudesse quantificar as promastigotas e determinar sua viabilidade em um único poço, com uso em sistemas automatizados de múltiplas amostras, permitindo o ensaio de drogas candidatas ao tratamento desta importante doença.