Aim: To evaluate bacterial nanocellulose (BNC) membranes incorporated with different antimicrobial agents regarding to their antimicrobial activityand potential to inhibit the multispecies biofilm formation. Methods: BNCs were incorporated with the following antimicrobial agents: G1)BNC + 0.12% chlorhexidine (BNC/CHX); G2) BNC + nitric oxide (BNC/NO); G3)BNC + 1% clindamycin (BNC/CLI); and G4) conventional BNC (BNC) (control). The antimicrobial activity against E. faecalis, A. naeslundiiand S. sanguiniswas evaluated by the agar diffusion test. To evaluate the antibiofilm effect, BNCs were exposed for 24 h to the mixed culture containing the three bacterial species (n = 12). After BNCs sonication to remove the remaining biofilm and plating the suspension in agar, the colony forming units (CFU)/mL were determined. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and Dunn (α = 5%). Results: The antimicrobial activity of BNC/CLIND was higher than that of controls, positive (filter discs with CHX 0.12%) and negative (BNC), for thethree bacterial species (P <0.05). When tested against S. sanguinis, BNC/CLIND also showed higher antimicrobial activity than BNC/CHX and BNC/NO (P <0.05). The biofilms formed in the membranes of the experimental groups had significantly lower CFU values compared to the BNC (P <0.05), withapproximately 3 log reduction. Conclusion: BNCs incorporated with CHX, CLI and NO presented effective antimicrobial and antibiofilm activityObjetivo:Avaliar membranas de nanocelulose bacteriana (BNC) incorporadas com diferentes agentes antimicrobianos quanto sua ação antimicrobiana e de inibição da formaçãode um biofilme multiespécie. Materiais e métodos: BNCs foram incorporadas com os seguintes agentes antimicrobianos: G1) BNC + clorexidina 0,12% (BNC/CHX); G2) BNC + óxido nítrico (BNC/NO); G3) BNC + clindamicina 1% (BNC/CLI);e G4) BNC convencional (BNC) (controle). A atividade antimicrobiana contra E. faecalis, A. naeslundiie S. sanguinis foi avaliada por meio do teste de difusão em ágar. Para avaliar a ação antibiofilme, as BNCs foram expostas por 24 h à cultura mista contendo as três espécies bacterianas (n = 12). Após sonicação das BNCs para remoção do biofilme remanescente e plaqueamento da suspensão em ágar, as unidades formadoras de colônias (UFC)/mL foram determinadas. Os dados foram analisados pelos testes Kruskal-Wallis e Dunn(α = 5%). Resultados: A atividade antimicrobiana da BNC/CLIND foi superior à dos controles, positivo (discos de filtro com CHX 0,12%) e negativo (BNC), para as três espécies bacterianas (P < 0,05). Quando testada contra S. sanguinis, BNC/CLIND também apresentou atividade antimicrobiana superior à BNC/CHX e BNC/NO (P < 0,05). Os biofilmes formados nas membranas dos grupos experimentais apresentaram valores de UFC significativamente inferiores comparados aos do controle, BNC (P < 0,05), com uma redução de aproximadamente 3 log. Conclusão: As BNCs incorporadas com CHX, CLI e NO apresentaram efetiva ação antimicrobiana e antibiofilme.