Dissertação
Desenvolvimento e otimização de método por HPLC-MS/MS para determinação do ácido caurenoico em extratos, tinturas e xaropes obtidos a partir das folhas de Mikania glomerata (guaco)
Autor
Moreira, Alan Francyswagner Canevari
Institución
Resumen
Natural products have been used for many years for medicinal purposes. The kaurenoic acid
(KA) is a secondary metabolite, a diterpene of the cauran class that is widespread among
medicinal plants and it is found in Sphagneticola trilobata, Copaifera langsdorffii, Annona
glabra, Mikania laevigata, Mikania glomerata, Smallanthus sonchifolius and Xylopia
frutescen. The KA is an antioxidant, anti-inflammatory, leishmanicide, has activity against
malaria and may present cytotoxic activity. Because it is a substance that contributes
synergistically to the pharmacological activity of a new medicine or an important marker for
existing medicines, a high performance liquid chromatography coupled to triple quadrupole
mass detector with tandem capabilities (HPLC-QqQ-MS/MS) was developed for the detection
and quantification of KA in complex matrices. Another method, with a qualitative and
verifiable purpose, was developed using the ultra-efficient liquid chromatography technique
coupled to a high resolution mass spectrometer of the simple quadrupole type and time of
flight (UHPLC-QTOF-MS/MS). The HPLC-QqQ-MS/MS method detected and quantified
KA in the samples obtained from extracts of Mikania glomerata (guaco) - a commercial
extract used as raw material by the pharmaceutical industry, a tincture prepared with the
leaves of the plant and two products purchased in the market (NL syrup and a BT syrup).
Quantification was performed by the construction of calibration curves by the standard
addition method. Concentrations of KA were 0.191 mg / mL in the commercial extract, 0.930
mg/mL in the tincture, 0.003 mg / mL in the NL syrup and less than the detection limit of the
method in the BT syrup. The UHPLC-QTOF-MS/MS method confirms the results obtained
and still allows the quantification of the BT syrup. The methods developed are excellent
alternatives for agile and efficient analysis of the KA in complex matrices from simple
dilution and injection in the equipments. Produtos naturais são usados há muitos anos para fins medicinais. O ácido caurenoico (AC) é
um metabólito secundário, um diterpeno da classe dos cauranos que está bastante difundido
entre as plantas medicinais e é encontrado nas espécies Sphagneticola trilobata, Copaifera
langsdorffii, Annona glabra, Mikania laevigata, Mikania glomerata,Smallanthus sonchifolius
e Xylopia frutescen. O AC é antioxidante, anti-inflamatório, leishmanicida, possui atividade
contra malária e pode apresentar atividade citotóxica. Por se tratar de uma substância que
contribui sinergicamente para a atividade farmacológica de um novo medicamento ou um
importante marcador para os medicamentos já existentes, foi desenvolvido um método por
cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de massas do tipo triplo
quadrupolo com recursos em tandem (HPLC-QqQ-MS/MS) para detecção e quantificação do
AC em matrizes de diferentes complexidades. Outro método, com finalidade qualitativa e
comprobatória, foi desenvolvido utilizando a técnica de cromatografia líquida de ultra
eficiência acoplada ao sistema de massas de alta resolução do tipo quadrupolo simples e
tempo de voo (UHPLC-QTOF-MS/MS). O método por HPLC-QqQ-MS/MS detectou e
quantificou o AC nas amostras obtidas a partir de extratos de Mikania glomerata (guaco),
sendo estas, um extrato comercial usado como matéria prima pela indústria farmacêutica, uma
tintura preparada com as folhas da planta e dois produtos adquiridos no mercado (xarope NL e
xarope BT). A quantificação foi realizada por meio de construção de curvas de calibração
pelo método de adição de padrão. As concentrações do AC foram 0,191 mg/mL no extrato
comercial, 0,930 mg/mL na tintura, 0,003 mg/mL no xarope NL e menor que o limite de
detecção do método no xarope BT. O método por UHPLC-QTOF-MS/MS confirma os
resultados obtidos e ainda possibilita a quantificação do AC no xarope BT. Os métodos
desenvolvidos são excelentes alternativas para análise ágil e eficiente do AC em matrizes
complexas a partir de simples diluição e injeção nos equipamentos. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior