Geopropolis is a resin mixed with mud, produced only by stingless bees. Despite being popularly known for its medicinal properties, few scientific studies have proven its biological activities. In this context, the objective of this study was to determine the chemical composition and antioxidant, anti-inflammatory, antimutagenic and antimicrobial activities of the Melipona orbignyi geopropolis. For this, the hydroalcoholic extract of geopropolis (HEGP) was prepared and its chemical composition determined by high performance liquid chromatography coupled to diode array detector and mass spectrometry (HPLC-DAD-MS). The antioxidant activity was determined by the direct capture of free radicals and inhibition of lipid peroxidation in human erythrocytes. The anti-inflammatory activity was evaluated by the inhibition of the hyaluronidase enzyme and the antimutagenic action was investigated by the method of induction of mitotic recombination and mutation in colonies of Saccharomyces cerevisiae colonies. The antimicrobial activities were determined against bacteria and yeasts, isolated from reference strains and hospital origin. The chemical composition of the HEGP shows a presence of flavonoids aromadendrin, naringenin, methyl-aromadendrin and methyl naringenin, as well as derivatives of glycosylated phenolic acids (gallic, cumaric and cinnamic acids) and terpenoids (sesqui and di triterpenes). The HEGP showed high antioxidant activity, by direct capture of free radicals, exhibiting IC50 of 18.3 ± 2.8 and 10.3 ± 0.5 μg / mL for the free radicals DPPH and ABTS respectively, and for the reduction of 93.2 ± 0.83% of oxidative hemolysis and 89.7 ± 2 , 13% of malondialdehyde levels, both at 50 μg / mL, superior results than the positive control, acid ascorbic. In addition, HEGP inhibited the activity of the inflammatory enzyme hyaluronidase in a concentration-dependent manner. The HEGP reduced the mutagenic effects in S. cerevisiae, reducing by 27.5 ± 2.5% the conversion of genes and 86.3 ± 0.4% of the number of mutant colonies. In relation to the antimicrobial activity, the HEGP presented bactericidal and fungicidal activity in all microorganisms evaluated including against strains of hospital origin resistant to the action of antimicrobial drugs. In conclusion, this study demonstrates for the first time the chemical composition of the extract of the geopropolis of M. orbignyi, as well as its antioxidant, anti-inflammatory, antimutagenic and antimicrobial activities.O geoprópolis é uma resina acrescida de barro, produzida apenas pelas abelhas sem ferrão. Apesar de ser conhecida popularmente por suas propriedades medicinais, são poucos os estudos científicos que comprovam suas atividades biológicas. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi determinar a composição química e as atividades antioxidante, anti-inflamatória, antimutagênica e antimicrobiana do geoprópolis de Melipona orbignyi. Para isto, o extrato hidroetanólico de geoprópolis (EHGP) foi preparado e sua composição química determinada por cromatografia líquida de alta performance acoplada ao detector de matriz de diodos e espectrometria de massa (HPLC-DAD-MS). A atividade antioxidante foi determinada pela captura direta de radicais livres DPPH/ABTS, inibição da hemólise oxidativa e peroxidação lipídica em eritrócitos humanos. A atividade anti-inflamatória foi avaliada pela inibição da enzima hialuronidase e a ação antimutagênica foi investigada pelo método de indução de recombinação mitótica e mutação em colônias de Saccharomyces cerevisiae. As atividades antimicrobianas foram determinadas contra bactérias e leveduras de referência e de origem hospitalar. A composição química do EHGP demonstrou a presença dos flavonoides aromadendrina, naringenina, metil-aromadendrina e metil naringenina, bem como derivados de ácidos fenólicos glicosilados (ácidos gálico, cumárico e cinâmico) e terpenoides (sesqui, di e triterpenos). O EHGP apresentou alta atividade antioxidante, pela captura direta de radicais livres, exibindo IC50 de 18,3 ± 2,8 e 10,3 ± 0,5 μg/mL para os radicais livres DPPH e ABTS respectivamente, e pela redução de 93,2 ± 0,83 % da hemólise oxidativa e 89,7 ± 2,13 % dos níveis de malondialdeído, ambos na concentração de 50 μg/mL, resultados superiores ao controle positivo ácido ascórbico. Adicionalmente, o EHGP Inibiu a atividade da enzima hialuronidase de forma concentração-dependente. O EHGP reduziu os efeitos mutagênicos em S. cerevisiae, reduzindo em 27,5 ± 2,5 % a conversão de genes e 86,3 ± 0,4 % do número de colônias mutantes. Em relação à atividade antimicrobiana, o EHGP apresentou atividade bactericida e fungicida em todos os micro-organismos avaliados, inclusive contra cepas de origem hospitalar resistentes à ação de fármacos antimicrobianos. Em conclusão, este estudo demonstra pela primeira vez a composição química do extrato do geoprópolis de M. orbignyi, bem como suas atividades antioxidantes, anti-inflamatória, antimutagênica e antimicrobiana.Fundação de Apoio ao Desenvolvimento do Ensino, Ciência e Tecnologia do Estado de Mato Grosso do Sul (FUNDECT)