The genus Acanthamoeba belongs to the group of free-living amoebae and is widely distributed in the environment. These protists are known to cause severe diseases, including Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicidal activity of an aqueous extract of green propolis against trophozoites and cysts of Acanthamoeba castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites in 24 and 48 hours, while at the concentration of 5 mg/ mL, 100% of trophozoites were inactivated in 72 hours. Acanthamoeba cysts were inactivated following 24 hours exposure to the extract at 40 mg/mL. When evaluated on human corneal epithelial (HCE) cells using a MTT-based viability assay, the extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/mL. The adhesion test performed showed that the propolis extract reduced the attachment of Acanthamoeba to HCE cells, in a dose-dependent manner. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba proving it to be a promising substance especially for the formulation of solutions for disinfection of surfaces, since it showed no toxicity to the HCE cells. However, more studies are needed to understand its mechanism of action.O gênero Acanthamoeba pertencente ao grupo das amebas de vida livre e é amplamente distribuído no ambiente. Estes protistas são conhecidos por causarem doenças graves, como a Encefalite Amebiana Granulomatosa em pacientes imunocomprometidos e ceratite amebiana, especialmente em usuários de lentes de contato imunocompetentes. Própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por exibir várias atividades biológicas. Neste estudo avaliou-se a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii. Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% de trofozoítos no prazo de 24 horas e 48 horas, enquanto a uma concentração de 5 mg/mL 100% dos trofozoítos foram inativados em 72 horas. Os cistos foram inativados após 24 horas de exposição ao extrato à concentração de 40 mg/mL. O efeito do extrato foi avaliado sobre células HCE (epiteliais de córnea humana), empregando-se ensaio de viabilidade baseado na redução do sal de tetrazólio MTT. O extrato não apresentou efeito citotóxico significativo sobre as células HCE, nas concentrações de 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL. O teste de adesão realizado mostrou que a fixação de Acanthamoeba a células HCE apresenta comportamento dose- dependente em relação ao extrato de própolis. Assim, este estudo demonstrou a eficácia da própolis verde contra trofozoítos e cistos de Acanthamoeba e provou ser uma substância promissora especialmente para a formulação de soluções para desinfecção de superfícies. No entanto, mais estudos são necessários para entender seu mecanismo de ação.