Expressão de uma serinoprotease de Crotalus durissus collilineatus em células de mamíferos e avaliação da sua atividade citotóxica sobre diferentes linhagens tumorais.

dc.contributorMelendez, Matias Eliseo
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2746759168721010
dc.contributorRodrigues, Renata Santos
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2516569970975669
dc.contributorÁvila, Veridiana de Melo Rodrigues
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6372375421254490
dc.contributorFrança, Johara Boldrini
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/7363922998357599
dc.creatorSilva, Elisa Alves Messias
dc.date2018-12-27T15:28:52Z
dc.date2018-12-27T15:28:52Z
dc.date2018-12-07
dc.date.accessioned2023-09-28T21:15:29Z
dc.date.available2023-09-28T21:15:29Z
dc.identifierSILVA, Elisa Alves Messias. Expressão de uma serinoprotease de Crotalus durissus collilineatus em células de mamíferos e avaliação da sua atividade citotóxica sobre diferentes linhagens tumorais. 2018. 42 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018.
dc.identifierhttps://repositorio.ufu.br/handle/123456789/23598
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9066748
dc.descriptionBACKGROUND: In the last decades, studies reporting the action of ophidian toxins with therapeutic potential have increased significantly and several new compounds have been tested, showing improvement in some pathologies, mainly on some types of cancers. Cancer of the head and neck is known as having anatomical features that define malignant tumors of the upper digestive tract. Taking into account the global increase in cancer cases, it is necessary to search for alternatives to inhibit tumor progression, as well as the development of efficient drugs. Some isolated or even recombinant toxins have been found to be a good alternative for the treatment of tumor cells. Among a range of toxins present in the venom of Crotalus durissus collilineatus are serine proteases, which act on plasma proteins associated with the blood coagulation pathway. Snake venoms are a vast source of pharmacologically active biomolecules. Despite the potential for exploration, there are few studies on the biological characterization of serine proteases with antitumor action. AIM:The objective of this work was cloning and expression of a serine protease present in the venom of Crotalus durissus collilineatus and evaluate its therapeutic potential in some cell lines derived from head and neck tumors, breast and lung cancer. MATERIALS AND METHODS: The sequence of serine protease was inserted into the pCI-Neo expression plasmid. The potential of the cell line constructed expressing the protein was tested in cell lines derived from head and neck tumors, as well as lineages derived from breast and lung by techniques such as Western Blot, MTS and apoptosis RESULTS: The expression of serine protease was confirmed by the Western blot assay, which was constructed from a transfection with the pCI-Neo expression plasmid containing the sequence of serine protease, and the effect of the same on the viability of the lineages tumors of the head and neck, breast and lung. Although preliminary assays made from a transient transfection of the pCI- Neo expression plasmid containing the serinoprotease showed a decrease in cell viability in the VU147T cell line. when the cell line was established, it did not present statistical significance in any of the tumor lines that were treated with the supernatant of the cell line with constitutive expression of the serinoprotease. CONCLUSION: few studies are found in the literature that report the action of these proteases on tumor cells. Thus, the studies presented in this study revealed the efficiency in the production of the recombinant serine protease of C. d. collilineatus, but further testing is needed to understand the mechanism of action of these proteases against tumor cells.
dc.descriptionTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)
dc.descriptionINTRODUÇÃO: Nas últimas décadas, trabalhos relatando a ação de toxinas ofídicas com potencial terapêutico têm aumentado significativamente e diversos novos compostos vêm sendo testados, apresentando melhoria em algumas patologias, principalmente sobre alguns tipos de cânceres. Levando em consideração o aumento global dos casos de câncer, se faz necessária a pesquisa de alternativas para inibir a progressão tumoral, bem como o desenvolvimento de fármacos eficientes. Algumas toxinas ofídicas isoladas ou mesmo recombinantes vêm sendo uma boa alternativa para o tratamento de células tumorais. Dentre uma gama de toxinas presentes na peçonha de Crotalus durissus collilineatus estão as serinoproteases, que atuam sobre proteínas plasmáticas associadas à via da hemostasia como um todo. E como as peçonhas de serpentes são uma vasta fonte de biomoléculas farmacologicamente ativas e, apesar do potencial de exploração, há poucos estudos relativos à caracterização biológica de serinoproteases com ação antitumoral. OBJETIVO: O objetivo principal deste trabalho foi realizar a clonagem e expressão de uma serinoprotease presente na peçonha de Crotalus durissus collilineatus e avaliar seu potencial terapêutico em algumas linhagens derivadas de tumores de cabeça e pescoço, câncer de mama e pulmão. MATERIAIS E MÉTODOS: A sequência da serinoprotease foi inserida no plasmídeo de expressão pCI-Neo. A expressão da proteína recombinante foi avaliada por Western Blot e o potencial da linhagem construída expressando a proteína de interesse foi testada em linhagens celulares derivadas de tumores de cabeça e pescoço, além de linhagens derivadas de mama e pulmão por técnicas como MTS e apoptose. RESULTADOS: Foi confirmada pelo ensaio de Western Blot a expressão proteica da serinoprotease na linhagem construída a partir de uma transfecção com o plasmídeo de expressão pCI-Neo contendo a sequência da serinoprotease, além de ter sido avaliado o efeito da mesma acerca da viabilidade das linhagens tumorais de cabeça e pescoço, mama e pulmão. Apesar dos ensaios preliminares feitos a partir de uma transfecção transiente do plasmídeo de expressão pCI-Neo contendo a serinoprotease ter mostrado uma diminuição da viabilidade celular na linhagem VU147T, quando a linhagem foi estabelecida (pCI-Neo_Serino clone 5), a mesma não apresentou significância estatística em nenhuma das linhagens tumorais que foram tratadas com o sobrenadante da linhagem construída com expressão constitutiva da serinoprotease recombinante. CONCLUSÃO: Poucos estudos são encontrados na literatura que relatam a ação destas proteases sobre células tumorais. Dessa forma, os estudos apresentados neste trabalho revelaram a eficiência na produção da serinoprotease recombinante de C. d. collilineatus, porém são necessários mais ensaios para compreender o mecanismo de ação destas proteases frente às células tumorais.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal de Uberlândia
dc.publisherBrasil
dc.publisherCiências Biológicas
dc.rightsAcesso Aberto
dc.subjectSerinoprotease
dc.subjectSerine Protease
dc.subjectCrotalus Durissus Collilineatus
dc.subjectViabilidade Celular
dc.subjectCell Viability
dc.subjectLinhagens Tumorais
dc.subjectTumor Cell Line
dc.subjectCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOS
dc.titleExpressão de uma serinoprotease de Crotalus durissus collilineatus em células de mamíferos e avaliação da sua atividade citotóxica sobre diferentes linhagens tumorais.
dc.typeTrabalho de Conclusão de Curso


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