| dc.contributor | Goulart Filho, Luiz Ricardo | |
| dc.contributor | http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781012P8 | |
| dc.contributor | Maranhao, Andrea Queiroz | |
| dc.contributor | http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782657J1 | |
| dc.contributor | Szabó, Matias Pablo Juan | |
| dc.contributor | http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786211E0 | |
| dc.contributor | Ortega, José Miguel | |
| dc.contributor | http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787778A4 | |
| dc.contributor | Espindola, Foued Salmen | |
| dc.contributor | http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727087Y6 | |
| dc.creator | Souza, Guilherme Rocha Lino de | |
| dc.date | 2016-06-22T18:43:33Z | |
| dc.date | 2007-12-18 | |
| dc.date | 2016-06-22T18:43:33Z | |
| dc.date | 2007-04-30 | |
| dc.date.accessioned | 2023-09-28T21:07:13Z | |
| dc.date.available | 2023-09-28T21:07:13Z | |
| dc.identifier | SOUZA, Guilherme Rocha Lino de. Construção de uma biblioteca de anticorpos (scFv)
apresentada em fagos para seleção, análise e
caracterização de antígenos do carrapato bovino (Boophilus
microplus). 2007. 97 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2007. | |
| dc.identifier | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15774 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9064382 | |
| dc.description | CAPÍTULO I:
The amplification of fragmentos scFv (single chain fragments variable) of
immunized animals is an important method to generation of monoclonal
antibodies. In this work chickens had been immunized with proteins of the larval
and adult phases of the Boophilus microplus for the generation of an antibodies
combinatorial library. Total RNA of spleen had been extracted and amplification
reactions (PCR) had been made using specific primers of the antibodies variable
regions with the purpose to get all the variability of the immune repertoire in the
construction of the library. Five cycles of selection (biopanning) had been made for
capture of clones scFv reactive to total proteins of larvae and adults ticks. The
affinity of clones to proteins was confirmed by ELISA demonstrating an increase of
the affinity of clones to the ligante throughout the five cycles of selection. The
sequencing of clones demonstrated a predominance of identical clones for the
library using both larvae and adults proteins. The recombinant antibodies had
been used for selection and characterization of epitope to proteins of the catle tick
for use as vaccine in the control of this parasite.
CAPÍTULO II:
With the objective of selecting and characterizing new ticks vaccine targets, we
developed a combinatorial antibody fragment library (scFv), expressed in the
capsid of bacteriophages, produced from tick larval and adult protein immunized
chicken Ig repertoire These antibodies (scFv) recognize a protein of the total larval
and adult s extract of the proximally 80 Kd, by western blotting tests, and the
sequence of these reactive proteins was checked by N-terminal sequencing. The
band corresponded to a GP80 protein with high similarity and is found in huge
quantities in parasite eggs and larval stages. With the objective of selecting
mimotopes of B. microplus by phage displayed epitope characterization, the
recombinant antibodies with major frequency were submitted to a selection against
a constricted peptide library displayed on phages. The cross reactivity was
confirmed by the recognition of one of those recombinant antibodes (scFv) to a
motif similar to GP80 sequence and others peptide (Serotonin receptor, Notch-like
protein, Paramiosin and Antigen B membrane) obtained from peptide library
selection. This work confirms the GP80 as a vaccine candidate and points out the
usefulness of phage display methodology for selection of new represents the
selection efficiency of new B. microplus.vaccine targets. | |
| dc.description | Doutor em Genética e Bioquímica | |
| dc.description | CAPÍTULO I:
A amplificação de fragmentos scFv (fragmentos variáveis de cadeia única)
de animais imunizados é um importante método na geração de anticorpos
monoclonais. Neste trabalho galinhas foram imunizadas com proteínas totais das
fases larval e adulta (teleóginas) do carrapato bovino Boophilus microplus para a
geração de uma biblioteca combinatorial de anticorpos anticarrapato. RNA total de
baço destes animais foram extraídos e reações de amplificação (PCR) foram
feitas utilizando iniciadores específicos das regiões variáveis dos anticorpos com
a finalidade de obter toda a variabilidade do repertório imune na construção da
biblioteca. Cinco ciclos de seleção (biopanning) foram feitos para captura dos
clones scFv reativos às proteínas totais de larvas e teleóginas. A afinidade dos
clones às proteínas totais do carrapato bovino foi confirmada por imunoensaio
(ELISA) demonstrando um aumento da afinidade dos clones ao ligante ao longo
dos cinco ciclos de seleção. O sequenciamento dos clones do quinto ciclo
demonstrou uma predominância de clones idênticos tanto para a biblioteca
construída utilizando proteínas de larvas, quanto para proteínas de teleóginas. Os
anticorpos recombinantes scFv foram utilizados para seleção e caracterização de
epítopos miméticos à proteínas do carrapato bovino para utilização como
imunógenos no controle deste parasita.
CAPÍTULO II:
Uma biblioteca de anticorpos scFv recombinantes apresentada em fagos
filamentosos foi utilizada para análise e caracterização de alvos protéicos contra o
carrapato bovino. Uma proteína com alta similaridade a proteína GP80, similar a
vitelina, uma abundante proteína encontrada nos ovos de parasitas adultos e
larvas, foi reconhecida pelos anticorpos (Fragmentos scFv) nos testes de western
blot e sua seqüência foi determinada por sequenciamento N-terminal. Os mesmos
clones foram utilizados para seleção de epitopos, em uma biblioteca de peptídeos
constrita de sete resíduos flanqueados por duas cisteínas (C7C) expressos em
fagos, para obtenção de peptídeos miméticos às proteínas de carrapato. O
resultado obtido foi confirmado com a identificação, pelo Fragmento scFv, de
motivos protéicos (GP80 e outras proteínas definidas como promissores
imunógenos como receptores de serotonina, antígeno B de membrana e outras),
expressos na biblioteca de peptídeos recombinantes C7C. A vitelina e outras
proteínas já descritas por alguns autores como sendo promissores antígenos
vacinais, aqui neste experimento aparecem melhor caracterizada, com regiões
imunogênicas reconhecidas por afinidade ao anticorpo recombinante gerado por
phage display. Os resultados demonstram a eficiência da utilização de bibliotecas
scFv na seleção de novos alvos protéicos contra o carrapato bovino. | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de Uberlândia | |
| dc.publisher | BR | |
| dc.publisher | Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica | |
| dc.publisher | Ciências Biológicas | |
| dc.publisher | UFU | |
| dc.rights | Acesso Aberto | |
| dc.subject | Boophilus microplus | |
| dc.subject | Anticorpo | |
| dc.subject | Fragmento scFv | |
| dc.subject | Biblioteca de anticorpos | |
| dc.subject | Biblioteca de peptídeos | |
| dc.subject | Genética molecular | |
| dc.subject | Antibodies | |
| dc.subject | ScFv fragments | |
| dc.subject | Phage display | |
| dc.subject | Antibodies library | |
| dc.subject | Peptide library | |
| dc.subject | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA | |
| dc.title | Construção de uma biblioteca de anticorpos (scFv)
apresentada em fagos para seleção, análise e
caracterização de antígenos do carrapato bovino (Boophilus
microplus) | |
| dc.type | Tese | |
