Adição de kisspeptina no meio de fertilização in vitro de embriões bovinos

Addition of kisspeptin in mean of in vitro fertilization bovine embryos

dc.contributorAlves, Kele Amaral
dc.contributorMacedo, Gustavo Guerino
dc.contributorSantos, Ricarda Maria dos
dc.contributorNonato, Amanda
dc.creatorCardoso, Graciele Freitas
dc.date2018-11-06T10:35:09Z
dc.date2018-11-06T10:35:09Z
dc.date2018-08-27
dc.date.accessioned2023-09-28T21:01:11Z
dc.date.available2023-09-28T21:01:11Z
dc.identifierCARDOSO, Graciele Freitas.Adição de kisspeptina no meio de fertilização in vitro de embriões bovinos. 2018. 64 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. Disponível em: http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.832
dc.identifierhttps://repositorio.ufu.br/handle/123456789/22749
dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.832
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9062591
dc.descriptionThe aim was to evaluate the different concentrations of Kisspeptin (Kp) and its effect in the process of in vitro fertilization of bovine embryos about the quality and production rates. In Experiment 1 the minimum concentration of Kp was determined to be used at medium FIV, starting from the treatments: control (n=240); Kp 10-5 M (n=223); Kp 10-6 M (n=225) and Kp 10-7 M (n=245). In Experiment 2, the oocytes were distributed in four treatments: control (n=362); Kp 10-1 M (n=425), Kp 10-7 M (n=304), and antagonist P234 4x10-6 M (n=424). The sperms were enabled by Percoll® discontinuous gradient, and coincubated with the oocytes from 16 to 18 hours in stove culture at 38.5°C with 5% of CO2. After this period, the zygotes were incubated in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) during 7 days in the same conditions. The rate of cleavage was evaluated 48 hours after fertilization and the rate of blastocysts and development stage/quality on the seventh day. A numerical score was adopted from 1 to 4 for evaluation of the development stage, as 1 corresponds to initial blastocyst, 2 blastocyst, 3 expanded blastocyst and 4 hatched blastocyst. The quality was evaluated by 3D confocal microscopy, and the analyzed data by PROC GLIMMIX/SAS and Kruskal-Wallis test. In Experiment 1, there wasn’t difference between the treatments rates of cleavage and blastocysts respectively: control (82,0%/34,2%); Kp 10-5 M (81,6%/26,9%); Kp 10-6 M (80,8%/29,3%) and Kp 10-7 M (80,8%/29,4%) (P > 0,05). In Experiment 2, the averages from the rates of cleavage and blastocysts were similar between the treatments: control (85,1%/38,1%), Kp 10-1 M (82,6%/33,6%), Kp 10-7 M (83,6%/34,9%) and P234 (81,4%/31,6%) (P > 0,05). A total of 514 embryos were produced, with the following averages of development score: control 2,89; Kp 10-1 M 3,04; Kp 10-7 M 2,79 and P234 2,63, without statistical difference among them (P > 0,05). About the quality, 360 embryos were evaluated, n=30/treatment/coloring. The parameters observed were production of reactive oxygen species (ROS), necrosis, apoptosis and mitochondrial potential. Each embryo supplied from 3 to 8 images (n=1.492) with fluorescence intensity in pixels. The control group presented bigger percentage of ROS: control 3,76%; Kp 10-1 M 0,25%; Kp 10-7 M 2,95% and P234 0,91% (P < 0,05). The percentage of cellular degeneration was similar between the treatments: control 1,51%; Kp 10-1 M 1,73%; Kp 10-7 M 4,71% and P234 1,98% (P > 0,05). The average of apoptosis was similar between the treatments: control 2,79%; Kp 10-7 M 1,67% and P234 6,11% (P > 0,05). The mitochondrial potential had bigger percentage in the group P234: control 0,51%; Kp 10-1 M 0,26%; Kp 10-7 M 0,22% and P234 1,43% (P < 0,05). The addition of kp-10 amid fertilization didn’t interfere in the rates of cleavage and blastocyst, as well as in the embryonic development stage. The Kp didn’t have effect in the apoptosis, necrosis, nor even in the mitochondrial potential. On the other hand, the Kp decreased the intracellular levels of ROS, suggesting its involvement in the antioxidant control.
dc.descriptionCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
dc.descriptionDissertação (Mestrado)
dc.descriptionObjetivou-se avaliar diferentes concentrações de Kisspeptina (Kp) e o seu efeito na fertilização in vitro de embriões bovinos quanto à qualidade e taxas de desenvolvimento embrionário inicial. No Experimento 1 foi determinada a concentração mínima de Kp a ser utilizada no meio FIV, a partir dos tratamentos: controle (n=240); Kp 10-5 M (n=223); Kp 10-6 M (n=225) e Kp 10-7 M (n=245). No Experimento 2, os ovócitos, foram distribuídos em quatro tratamentos: controle (n=362); Kp 10-1 M (n=425), Kp 10-7 M (n=304), e antagonista P234 4x10-6 M (n=424). Os espermatozoides foram capacitados por gradiente descontínuo de Percoll®, e co-incubados com os ovócitos por 16 a 18h em estufa de cultura a 38,5°C com 5% de CO2. Após esse período, os zigotos foram incubados em Fluido Sintético de Oviduto (SOF) durante sete dias nas mesmas condições. A taxa de clivagem foi avaliada 48h após a fertilização e a taxa de blastocistos e estágio de desenvolvimento/qualidade no sétimo dia. Foi adotado um escore numérico de 1 a 4 para avaliação do estágio de desenvolvimento, onde 1 corresponde a blastocisto inicial, 2 blastocisto, 3 blastocisto expandido e 4 blastocisto eclodido. A qualidade foi avaliada por microscopia confocal 3D, e os dados analisados pelo PROC GLIMMIX/SAS e teste de Kruskal-Wallis. No Experimento 1, não houve diferença entre os tratamentos para taxas de clivagem e blastocistos respectivamente: controle (82,0%/34,2%); Kp 10-5 M (81,6%/26,9%); Kp 10-6 M (80,8%/29,3%) e Kp 10-7 M (80,8%/29,4%) (P > 0,05). No Experimento 2, as médias das taxas de clivagem e blastocisto foram semelhantes entre os tratamentos: controle (85,1%/38,1%), Kp 10-1 M (82,6%/33,6%), Kp 10-7 M (83,6%/34,9%) e P234 (81,4%/31,6%) (P > 0,05). Foram produzidos 514 embriões, com as seguintes médias de escore de desenvolvimento: controle 2,89; Kp 10-1 M 3,04; Kp 10-7 M 2,79 e P234 2,63, sem diferença estatística entre os mesmos (P > 0,05). Quanto à qualidade, foram avaliados 360 embriões, n=30/tratamento/corante. Os parâmetros observados foram produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), necrose, apoptose e potencial mitocondrial. Cada embrião forneceu de 3 a 8 imagens (n=1.492) com intensidade de fluorescência em pixels. O grupo controle apresentou maior porcentagem de ROS: controle 3,76%; Kp 10-1 M 0,25%; Kp 10-7 M 2,95% e P234 0,91% (P < 0,05). A porcentagem de degeneração celular foi semelhante entre os tratamentos: controle 1,51%; Kp 10-1 M 1,73%; Kp 10-7 M 4,71% e P234 1,98% (P > 0,05). A média de apoptose, foi semelhante entre os tratamentos: controle 2,79%; Kp 10-7 M 1,67% e P234 6,11% (P > 0,05). O potencial mitocondrial teve maior porcentagem no grupo P234: controle 0,51%; Kp 10-1 M 0,26%; Kp 10-7 M 0,22% e P234 1,43% (P < 0,05). A adição de kp-10 no meio de fertilização não interferiu nas taxas de clivagem e blastocisto, bem como no estágio de desenvolvimento embrionário. A Kp não teve efeito na apoptose, necrose, nem tampouco no potencial mitocondrial. Por outro lado, a Kp diminuiu os níveis intracelulares de ROS, sugerindo o seu envolvimento no controle antioxidante.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal de Uberlândia
dc.publisherBrasil
dc.publisherPrograma de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
dc.rightsAcesso Aberto
dc.subjectAntagonista P-234
dc.subjectAntagonist P-234
dc.subjectBlastocistos
dc.subjectBlastocysts
dc.subjectKISS1
dc.subjectKISS1R
dc.subjectVeterinária
dc.subjectFertilização in vitro
dc.subjectBovino - Fecundidade
dc.subjectBlastocisto
dc.subjectCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMAL
dc.titleAdição de kisspeptina no meio de fertilização in vitro de embriões bovinos
dc.titleAddition of kisspeptin in mean of in vitro fertilization bovine embryos
dc.typeDissertação


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